异硫氰酸荧光素标记岩藻多糖，FITC-Fucoidan的反应步骤

岩藻多糖（Fucoidan）是一种从褐藻中提取的硫酸化多糖，具有多种生物活性，如、、抗凝血和免疫调节功能。为了实现其在生物医学领域的可视化研究，常采用荧光标记技术，其中异硫氰酸荧光素（FITC）作为经典的绿色荧光染料被广泛用于标记多糖分子，生成FITC-岩藻多糖（FITC-Fucoidan），便于追踪其细胞摄取、体内分布及药代动力学研究。

化学性质及标记原理：

FITC分子含有高度活性的异硫氰酸酯官能团（–N=C=S），能与含有游离氨基的分子发生共价反应，形成稳定的硫脲键（–NH–CS–NH–）。而岩藻多糖主要由羟基和少量羧基组成，氨基含量有限，因此标记前一般需要对岩藻多糖进行氨基化改性，如通过还原胺化引入游离氨基，提升其与FITC反应的位点和效率。

标记反应步骤概述

岩藻多糖氨基化预处理

取适量岩藻多糖溶于适宜缓冲液（如0.1 M PBS，pH 7.4）。

使用还原胺化方法，如将多糖与氨基化试剂（乙二胺或氨基乙醇）和还原剂（NaBH3CN）共同反应，使部分羰基或醛基转化为氨基官能团。

反应温和，控制在室温或37℃，反应时间一般为数小时至过夜。

反应后通过透析去除未反应试剂和副产物，获得氨基化岩藻多糖。

FITC溶液制备

取FITC粉末，溶解于无水DMSO或乙醇中，浓度一般为1-10 mg/mL。

避光操作，防止FITC降解。

偶联反应

将氨基化岩藻多糖溶液加入适量的缓冲液（通常为碳酸盐缓冲液，pH 8.0-9.0），以保证氨基的亲核性及FITC活性的稳定。

缓慢滴加FITC溶液，染料与多糖的摩尔比根据预期标记度调整，一般为1:10至1:50（FITC:多糖单元）。

反应体系在避光条件下于室温或4℃轻轻搅拌4-12小时。

反应终止与纯化

反应结束后，使用透析膜（分子量截断一般为3.5-10 kDa）对反应混合物进行透析，连续更换缓冲液数次，彻底去除未结合的游离FITC和低分子杂质。

透析时间一般为48-72小时，确保纯化彻底。

纯化后样品可冻干保存，便于长期储存。

产物鉴定

采用紫外-可见光谱测定FITC的吸收峰（约490 nm）以确认标记。

荧光光谱测定标记后的多糖发射峰（约520-530 nm）验证荧光活性。

进一步采用红外光谱（FTIR）或核磁共振（NMR）确认共价结合结构。

凝胶渗透色谱（GPC）用于分析标记前后分子量变化。

产品名称：异硫氰酸荧光素标记岩藻多糖，FITC-Fucoidan

纯度：95%+

性状：基于不同的分子量，呈白色 / 类白色固体，或液体。

溶剂：溶于二氯甲烷、DMSO、水等常规有机溶剂。

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

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