FITC-胰蛋白酶(Fluorescein Isothiocyanate-labeled Trypsin)是胰蛋白酶(Trypsin)与荧光染料异硫氰酸荧光素(FITC)共价结合形成的荧光标记酶。
胰蛋白酶是一种广泛使用的蛋白水解酶,主要用于切割蛋白质的特定肽键,而FITC作为一种绿色荧光染料,通过其异硫氰酸基团与胰蛋白酶的赖氨酸残基等氨基形成共价键,实现胰蛋白酶的荧光标记。
组成与性质
胰蛋白酶(Trypsin)
胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶,能够选择性地切割赖氨酸和精氨酸的羧基端肽键,常用于生物化学和分子生物学研究中的蛋白质消化、细胞脱离等过程。
FITC标记
FITC分子通过异硫氰酸基团与胰蛋白酶的游离氨基共价结合,赋予胰蛋白酶荧光特性,激发波长约490 nm,发射波长约520 nm,便于荧光检测。
性质特点
荧光活性
FITC-胰蛋白酶具有强烈的绿色荧光信号,便于在荧光显微镜、流式细胞术及荧光板读数仪中检测。
酶活性保留
经过FITC标记后,胰蛋白酶通常保留其酶学活性,能够继续执行蛋白水解功能,但标记程度过高可能对活性有一定影响。
水溶性好
FITC-胰蛋白酶在水溶液中稳定,适合多种生物实验条件。
共价结合稳定
FITC与胰蛋白酶形成的硫脲键较为稳定,保证荧光信号的持久性,但需注意避免强光照射和极端pH以防荧光淬灭。
使用注意事项
保存条件
FITC-胰蛋白酶应避光保存,通常置于4℃冷藏,以保持酶活性和荧光强度。
缓冲液选择
使用适宜的缓冲体系(pH 7-8)以维持酶的稳定性和荧光性能。
酶活性监测
标记后需确认酶活性,避免因标记过度导致活性丧失。
避免光漂白
操作时避免长时间强光照射,减少荧光淬灭现象。
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