DSPE-PEG-Nb助力纳米*体脂质体构建及其在光热增强T细胞*中的应用

链接：https://link.springer.com/article/10.1186/s12951-024-02781-1

作者：谢申霞,韦石,段斯良,黄夏宁,刘爱群,侯晓琼,林宣东,钟丹妮,孙书阳,丁自强,杨小梅,陈晓媛&路晓玲 

摘要：

背景：基于T细胞的免疫疗法在募集和激活针对实体瘤的*特异性T细胞方面面临巨大挑战。其中，利用纳米*体（Nb）或纳米*体（Nbs）构建T细胞衔接器已成为增强T细胞**效力的更具实用价值的方法。本研究设计了一种新型Nb介导的多功能T细胞衔接器（Nb-MuTE），它不仅可以将效应T细胞募集到*组织中，还能与光热效应协同作用，有效激活T细胞的**免疫功能。

结果：Nb-MuTE 是基于吲哚菁绿 (ICG) 脂质体构建的，表面结合了 CD105 和 CD3 Nbs，表现出对*和 T 细胞均具有*的靶向性，能够增强*特异性 T 细胞的活化、增殖和细胞因子分泌。值得注意的是，在体外和体内实验中，ICG 诱导的光热效应进一步增强了 Nb-MuTE 介导的 T 细胞的免疫**功能。

结论：这种新平台Nb-MuTE为临床*实体*增强T细胞反应提供了一种实用的“一体化”策略。

节选：

CD105/CD3 Nb-LipoICG的制备及纯化

脂质体 (Lipo) 采用略加修改的薄膜水化方法制备。简而言之，将二硬脂酰磷脂酰胆碱 (DSPC; Aladdin，中国)、胆固醇琥珀酸单酯 (Chol; Aladdin，中国) 和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇 2000 (DSPE-PEG-2000; Aladdin，中国) 以 3:2:0.015 的摩尔比溶于圆底烧瓶中的氯仿和甲醇 (4:1 (v/v) ) 的混合溶液中。用旋转蒸发仪在 50 oC下完全蒸发混合溶剂。形成的脂质膜用 1×PBS 缓冲液复水至总脂质的终浓度为 2 mg/mL，然后用 0.22 μm 针滤器过滤。通过孔径为 100 nm 的聚碳酸酯膜（Nuclepore，美国加利福尼亚州普莱森顿）的多次挤压步骤（至少 10 次）使脂质体尺寸均匀化。

将5 mg/mL的ICG-甲醇溶液按质量梯度加入到脂质混合物中，同法制备包覆ICG的纳米脂质体（LipoICG），上Sephadex G-50葡聚糖凝胶柱除去未包覆的游离ICG。将功能性Nb修饰的LipoICG（CD105/CD3 Nb-LipoICG）分别将CD105 Nb和CD3 Nb与DSPE-PEG2000-NHS共孵育，NHS基团在4 ℃下与CD105 Nb和CD3 Nb上的氨基发生亲核取代反应，形成稳定的酰胺键，继续搅拌24 h后形成DSPE-PEG-Nb胶束。

将形成的DSPE-PEG-Nb胶束加入LipoICG中，在氮气保护下反应10min，放入微孔板恒温振荡器（德国Eppendorf公司）中，以缓慢的振荡速度在4℃下孵育12h，用Sephadex G-50柱除去游离的未结合的Nb。

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