文献:尺寸、电荷和肽配体长度对小有机纳米粒子肾脏靶向性的影响
链接:https://aiche.onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1002/btm2.10173
作者:黄毅, 蒋凯瑞, 张旭亭, 殷志忠
节选:
胶束合成
采用标准Fmoc介导的固相肽合成法,在全自动PS3肽合成仪(美国亚利桑那州图森市Protein Technologies公司)上,使用rink Amide树脂(美国亚利桑那州图森市Protein Technologies公司)合成肽。所有肽序列的N末端均添加半胱氨酸,以进行硫醚键合反应。然后用体积比为94:2.5:2.5:1的三氟乙酸:1,2-乙二硫醇:水:三异丙基硅烷将肽从树脂上切下。切下的肽用冰冷的乙醚沉淀并洗涤数次,溶于Milli-Q纯水中,冻干后储存于-20°C。粗肽通过反相高效液相色谱法(HPLC)(Shimadzu,京都,日本)在 C18 柱(Phenomenex,Torrance,CA)上在 55°C 下用 0.1% 甲酸的乙腈/水混合物进行纯化。
使用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析 (MALDI-TOF) (Autoflex speed, Bruker, Billerica, MA) 对纯化的肽进行表征,并通过硫醚键与 1,2 二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺 N-[马来酰亚胺 (聚乙二醇)-1000/2000/5000] 或 DSPE-PEG (1000)-马来酰亚胺/DSPE-PEG (2000)-马来酰亚胺/DSPE-PEG (5000)-马来酰亚胺 (Avanti Polar Lipids, Alabaster, AL) 结合,将等摩尔量的脂质和纯肽在 Milli-Q 水 (pH 7.2) 中混合,室温下轻轻搅拌超过 24 小时。
混合物经C4柱(Phenomenex公司,加州托伦斯)进一步纯化,并用如上所述的MALDI-TOF进行表征。荧光团偶联单体的合成如下:将等摩尔量的Cyanine7 NHS酯(Lumiprobe公司,马里兰州亨特谷)与1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺N-[氨基(聚乙二醇)-1000/2000/5000](铵盐)或DSPE-PEG(1000)-胺/DSPE-PEG(2000)-胺/DSPE-PEG(5000)-胺(Avanti Polar Lipids公司,阿拉巴马州阿拉巴斯特)在0.1 M碳酸氢钠溶液(pH 8.3)中混合,室温过夜。混合物经C4柱纯化,并用如上所述的MALDI-TOF进行表征。
通过自组装合成了13种类型的胶束。合成了由不同摩尔比的两亲分子组成的胶束:100% DSPE-PEG-肽、50:50摩尔比的DSPE-PEG-甲氧基:DSPE-PEG-肽、90:10摩尔比的DSPE-PEG-肽:DSPE-PEG-Cy7以及45:45:10摩尔比的DSPE-PEG-甲氧基:DSPE-PEG-肽:DSPE-PEG-Cy7。将所有单体溶解于甲醇或氯仿中,并用氮气吹干形成薄膜。薄膜在真空下干燥过夜,并在80°C下水化30分钟。用于 DLS、zeta 电位测量和 TEM 的胶束在 Milli-Q 水中水化,而用于体内给药的胶束在磷酸盐缓冲溶液 (PBS) 中水化。
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