文献：尺寸、电荷和肽配体长度对小有机纳米粒子肾脏靶向性的影响

链接：https://aiche.onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1002/btm2.10173

作者：黄毅， 蒋凯瑞， 张旭亭， 殷志忠

节选：

胶束合成

采用标准Fmoc介导的固相肽合成法，在全自动PS3肽合成仪（美国亚利桑那州图森市Protein Technologies公司）上，使用rink Amide树脂（美国亚利桑那州图森市Protein Technologies公司）合成肽。所有肽序列的N末端均添加半胱氨酸，以进行硫醚键合反应。然后用体积比为94:2.5:2.5:1的三氟乙酸:1,2-乙二硫醇:水:三异丙基硅烷将肽从树脂上切下。切下的肽用冰冷的乙醚沉淀并洗涤数次，溶于Milli-Q纯水中，冻干后储存于-20°C。粗肽通过反相高效液相色谱法（HPLC）（Shimadzu，京都，日本）在 C18 柱（Phenomenex，Torrance，CA）上在 55°C 下用 0.1% 甲酸的乙腈/水混合物进行纯化。

使用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析 (MALDI-TOF) (Autoflex speed, Bruker, Billerica, MA) 对纯化的肽进行表征，并通过硫醚键与 1,2 二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺 N-[马来酰亚胺 (聚乙二醇)-1000/2000/5000] 或 DSPE-PEG (1000)-马来酰亚胺/DSPE-PEG (2000)-马来酰亚胺/DSPE-PEG (5000)-马来酰亚胺 (Avanti Polar Lipids, Alabaster, AL) 结合，将等摩尔量的脂质和纯肽在 Milli-Q 水 (pH 7.2) 中混合，室温下轻轻搅拌超过 24 小时。

混合物经C4柱（Phenomenex公司，加州托伦斯）进一步纯化，并用如上所述的MALDI-TOF进行表征。荧光团偶联单体的合成如下：将等摩尔量的Cyanine7 NHS酯（Lumiprobe公司，马里兰州亨特谷）与1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺N-[氨基（聚乙二醇）-1000/2000/5000]（铵盐）或DSPE-PEG(1000)-胺/DSPE-PEG(2000)-胺/DSPE-PEG(5000)-胺（Avanti Polar Lipids公司，阿拉巴马州阿拉巴斯特）在0.1 M碳酸氢钠溶液（pH 8.3）中混合，室温过夜。混合物经C4柱纯化，并用如上所述的MALDI-TOF进行表征。

通过自组装合成了13种类型的胶束。合成了由不同摩尔比的两亲分子组成的胶束：100% DSPE-PEG-肽、50:50摩尔比的DSPE-PEG-甲氧基：DSPE-PEG-肽、90:10摩尔比的DSPE-PEG-肽：DSPE-PEG-Cy7以及45:45:10摩尔比的DSPE-PEG-甲氧基：DSPE-PEG-肽：DSPE-PEG-Cy7。将所有单体溶解于甲醇或氯仿中，并用氮气吹干形成薄膜。薄膜在真空下干燥过夜，并在80°C下水化30分钟。用于 DLS、zeta 电位测量和 TEM 的胶束在 Milli-Q 水中水化，而用于体内给药的胶束在磷酸盐缓冲溶液 (PBS) 中水化。

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