iFluor 594 Styramide 是一款基于 iFluor 594 荧光染料的活性衍生物,含有酪酰胺(Tyramide)功能基团,专为高灵敏度的生物标记和信号放大设计。其结合了 iFluor 594 染料优异的光学性能和酪酰胺的高效共价偶联能力,广泛应用于免疫荧光、原位杂交及多重荧光成像等领域。
化学结构与基本特性
染料核心 iFluor 594
iFluor 594 是一种光谱性能优异的氰ine类荧光染料,激发波长约为 590 nm,发射波长约为 610 nm,属于橙红色荧光区。该波段兼顾了高亮度和低背景,使其适用于细胞、组织等多种生物样本的荧光检测。
酪酰胺(Styramide)功能基团
酪酰胺结构使染料能够在辣根过氧化物酶(HRP)的催化下,通过过氧化氢活化形成自由基,与邻近蛋白质中的酪氨酸残基发生共价结合。这种共价沉积机制使染料牢固附着于靶标区域,大幅增强检测信号,减少染料扩散,*大提高了检测灵敏度和空间分辨率。
溶解性和稳定性
iFluor 594 Styramide 具有良好的水溶性和缓冲兼容性,易于操作。染料本身具有高光稳定性,在激光照射或长时间成像条件下荧光信号衰减缓慢,适合高强度或长时程的成像实验。
主要应用领域
1. 信号放大技术(Tyramide Signal Amplification, TSA)
iFluor 594 Styramide 是 TSA 技术的核心试剂之一。在该技术中:
目标分子上的 HRP 催化过氧化氢分解产生活性自由基
iFluor 594 Styramide 被活化形成高反应性中间体
该中间体快速与靶标附近蛋白质中的酪氨酸共价结合
结果是靶标区域染料大量沉积,*大提升荧光信号强度,特别适用于低表达蛋白或稀有靶点的检测。
2. 免疫荧光染色(IF)
适合检测细胞或组织切片中的蛋白质分布。iFluor 594 的光谱位于黄橙色区,能有效避免生物组织的自发荧光干扰,呈现明亮清晰的信号。
3. 原位杂交(FISH/ISH)
可用于标记核酸探针,实现基因定位与表达分析,保证信号强度和空间分辨率,支持多重荧光分析。
4. 多重荧光成像
由于 iFluor 594 发射光谱与其他常用染料(如 iFluor 488、iFluor 647 等)分离良好,方便在同一样本中进行多靶点标记和检测。
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