Biotin-11-dCTP是一种核苷酸衍生物,广泛应用于分子生物学和基因组学研究中,主要用于标记DNA分子。它是脱氧胞苷三磷酸(dCTP)的生物素修饰形式,通过一个含11个碳原子的空间臂将生物素分子连接到脱氧胞苷的糖环上,从而实现对DNA的生物素标记。
化学结构与特性
Biotin-11-dCTP由三部分组成:脱氧胞苷三磷酸(dCTP)、一个11个碳的长链空间臂和生物素分子。空间臂设计确保生物素与核苷酸酶结合位点保持一定距离,避免因生物素体积较大而阻碍DNA聚合酶的催化活性,从而保证其良好的酶学活性和掺入效率。生物素分子可以与亲和素、链霉亲和素以及其他生物素结合蛋白高亲和力结合,实现后续检测或纯化步骤。
Biotin-11-dCTP水溶性良好,稳定性强,适用于多种缓冲体系,通常建议于-20°C避光保存,避免反复冻融以维持其活性。
应用领域
DNA标记与探针制备
在PCR扩增、体外转录和体外合成过程中,Biotin-11-dCTP可部分替代天然dCTP掺入DNA分子,使合成的DNA带有生物素标记。这种生物素化的DNA探针能通过生物素-亲和素系统进行高灵敏度检测,常用于Southern blot、杂交芯片和原位杂交等技术。
分子杂交检测
利用Biotin-11-dCTP标记的DNA探针,结合亲和素-辣根过氧化物酶(HRP)、亲和素-碱性磷酸酶(AP)等信号放大系统,可实现对特定核酸序列的高效检测,广泛应用于基因表达分析、基因分型和突变检测。
核酸纯化与富集
带有生物素标记的DNA片段可以被亲和素磁珠或亲和柱特异性捕获,从而实现对目标序列的选择性富集。这种方法广泛用于靶向DNA捕获、二代测序样品制备及核酸样品的纯化。
DNA复制和修复研究
由于其能被DNA聚合酶有效掺入,Biotin-11-dCTP成为研究DNA复制动力学、损伤修复机制的理想工具。标记新合成的DNA链条,有助于追踪DNA合成进程,分析细胞周期和修复效率。
单分子和纳米技术应用
利用生物素-亲和素高亲和力的结合特性,Biotin-11-dCTP被用于单分子核酸标记、纳米传感器和分子诊断平台的开发,提升检测灵敏度和特异性。
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