Cyanine5-PNA,cy5-花生凝集素的合成过程研究
Cyanine5-PNA(Cy5-Peanut Agglutinin)是将荧光染料Cyanine5(Cy5)共价连接至花生凝集素(PNA, Peanut Agglutinin)上的荧光探针,常用于检测细胞表面O暴露的 β-Gal(1-3)GalNAc 结构。其特异性结合能力使其成为研究糖蛋白分布、糖基转移酶活性和癌变相关糖链变化的重要工具。
合成该标记物的过程主要包括以下步骤:
纯化PNA蛋白:从Arachis hypogaea中提取得到PNA或通过重组表达获得,使用盐析、层析(凝胶过滤或亲和层析)纯化得到单体或二聚体形式。
标记反应:将Cy5-NHS酯溶解于无水DMSO或DMF中,并缓慢滴加至含有PNA蛋白的碱性缓冲液(如pH 8.3的碳酸盐缓冲液)中,使其与蛋白表面赖氨酸残基上的氨基反应,生成酰胺键。通常反应在4–25°C下进行2–4小时,避光操作。
去除游离染料:使用凝胶渗透色谱(如Sephadex G-25)、透析或超滤去除未反应的游离Cy5。
表征:通过紫外-可见吸收法测定Cy5的连接度(Dye-to-protein ratio),并通过SDS-PAGE(含近红外扫描)及质谱确认标记完整性。可使用糖素竞争抑制实验验证其结合位点特异性未受干扰。
Cy5-PNA 在共聚焦显微镜下发出红色荧光,可高分辨率显示细胞膜或胞外糖结构,
产品名称:Cyanine5-PNA,cy5-花生凝集素
纯度:95%+
性状:基于不同的分子量,呈白色 / 类白色固体,或液体。
溶剂:溶于二氯甲烷、DMSO、水等常规有机溶剂。
储藏条件:-20°C干燥避光保存
包装规格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务,如活性酯(NHS酯)、马来酰亚胺(MAL)、叠氮(N₃)、炔基(alkyne)等,便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。
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