Cyanine5-LPS,Cyanine5荧光染料标记脂多糖LPS的合成及纯化过程
Cyanine5-LPS 是一种将近红外荧光染料 Cyanine5(Cy5)与脂多糖(LPS, Lipopolysaccharide)共价连接形成的生物探针,适用于研究免疫激活、细菌识别、细胞成像与炎症路径分析。LPS 是革兰氏阴性菌外膜的重要组分,能与巨噬细胞表面的 TLR4(Toll-like receptor 4)结合并诱导免疫反应。将其标记上荧光染料有助于在分子层面可视化其生物分布与受体相互作用。
合成过程 通常利用 LPS 分子中的羧基或醛基与 Cyanine5-NH₂ 或 Cy5-NHS 酯进行反应:
将LPS溶解于水或PBS缓冲液中,使用EDC/NHS活化LPS上的羧酸基团,生成活性酯中间体;
随后加入溶于DMSO中的 Cy5-NH₂,使其在pH 6.5–7.5 条件下缓慢反应,通常在4°C避光摇床中反应12–24小时;
另一种策略是将Cy5-NHS酯直接添加至LPS溶液中,利用其表面胺基共价连接,形成稳定酰胺键。
纯化过程 需彻底去除未结合的自由染料。一般采用以下方法:
透析(3.5 kDa–10 kDa MWCO膜),在PBS中进行48小时以上换液;
或采用 凝胶渗透色谱(如 Sephadex G-25),以分离大分子LPS标记物与游离染料;
使用 紫外-可见分光光度法 检测纯化效果(λmax ≈ 650 nm),确保无游离染料干扰。
终产物 Cy5-LPS 可通过质谱(MALDI-TOF)和凝胶电泳确认标记程度,并用于细胞培养实验或体内追踪研究,具有高灵敏度和良好的可视化性能。
产品名称:Cyanine5-LPS,Cyanine5荧光染料标记脂多糖
纯度:95%+
性状:基于不同的分子量,呈白色 / 类白色固体,或液体。
溶剂:溶于二氯甲烷、DMSO、水等常规有机溶剂。
储藏条件:-20°C干燥避光保存
包装规格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务,如活性酯(NHS酯)、马来酰亚胺(MAL)、叠氮(N₃)、炔基(alkyne)等,便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。
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