产品名称：透明质酸-荧光素，HA-FITC的合成方法

合成方法

1 核心合成路线：碳二亚胺法（EDC/NHS活化）

步骤1：HA羧基的活化

试剂：

HA（分子量100 kDa，100 mg）、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺（EDC，50 mg）、N-羟基琥珀酰亚胺（NHS，30 mg）、MES缓冲液（0.1 M，pH 5.5）。

反应条件：

HA溶于MES缓冲液（10 mL），加入EDC和NHS，室温 搅拌 30分钟，生成 NHS酯中间体（通过¹H NMR验证δ≈2.8 ppm处的琥珀酰亚胺质子）。

步骤2：FITC的偶联

试剂：

FITC（20 mg）、DMSO（2 mL）。

反应条件：

将FITC的DMSO溶液逐滴加入活化的HA溶液中，避光 搅拌 4小时，生成 HA-FITC（通过UV-Vis光谱验证495 nm处的吸收峰）。

反应液经 透析（MWCO 10 kDa） 去除未反应的FITC和副产物，冷冻干燥得到黄色固体（产率 85%）。

2 替代路线：直接偶联法（低效率）

试剂：

HA（100 mg）、FITC（20 mg）、碳酸氢钠（NaHCO₃，50 mg）、DMSO/水（1:1，v/v）。

反应条件：

HA溶于混合溶剂，加入FITC和NaHCO₃，室温 搅拌 24小时，偶联效率 <30%（因FITC与羧基反应活性低）。

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