文献：Targeted delivery and triggered release of liposomal doxorubicin enhances cytotoxicity against human B lymphoma cells

作者：T Ishida a 1, M.J Kirchmeier a 2, E.H Moase a, S Zalipsky b, T.M Allen 

文献链接：https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0005273601004096

摘要：

制备DXR-SIL[抗CD19]，并在65°C下通过硫酸铵负载法负载DXR。由DXR-DOPE/mPEG-DSPE[抗CD19]、DXR-DOPE/CHEMS/mPEG-DSPE[抗-CD19]、DXR-2OPE/mPEG-S-S-DSPE[anti-CD19]或DXR-DOPE-CHEMS/mPEG-S-DSPE[anti-CD19]组成的脂质体DXR的其他靶向制剂的脂质摩尔比在文本或表或图图例中标明；通过使用硫酸铵梯度[29]进行远程装载，对药物进行了细微修改。

对于含有DOPE/CHEMS/PEG-DSPE的制剂，脂质膜在pH 8.5的250 mM硫酸铵中水合，对于含有DONE/PEG-DSPE的制剂，在pH 9.0的条件下水合，并加入微量的NaOH，直至完全水合。挤出后，通过用10%蔗糖、25 mM Trizma碱在pH 8.5或pH 9.0（视情况而定）平衡的Sephadex G-50柱洗脱来交换外部缓冲液。较高的pH值是使DOPE制剂自组装成双层所必需的[16]，[30]。将DXR以0.2:1（w/w）的DXR/PL比加入脂质体中，并在22°C下孵育脂质体15分钟。

脂质体包封的DXR通过Sephadex G-50柱色谱法与游离DXR分离，用脱气HEPES缓冲液洗脱。根据先前描述的方法，使用125I标记的抗CD19单克隆抗体作为示踪剂，将抗CD19 mAb偶联到脂质体上的Mal-PEG-DSPE上。

甲醇提取后，通过分光光度法（λ=490nm）测定脂质体包埋DXR的浓度。使用Fiske–Subbarow比色法测定磷脂浓度。在体内实验中，所有单克隆抗体的密度通常在30-60μg抗CD19/μmol PL的范围内，在体外实验中，密度在65-80μg抗-CD19/μmol PL的范围内。

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