FITC（Fluorescein Isothiocyanate）是一种广泛使用的荧光染料，是荧光素（Fluorescein）衍生的异硫氰酸酯活性化合物，具有良好的荧光性质和反应活性，常用于标记蛋白质、多肽、抗体、氨基寡核苷酸等含胺类生物分子。

FITC 是一种绿色荧光染料，在激发波长约为495 nm（蓝光激发）时可发射520–530 nm的绿色荧光，具有高量子产率和良好的成像对比度，是荧光标记和成像领域的经典工具分子。

常用名荧光素

英文名fluorescein

CAS号518-45-6

分子量332.30600

分子式C20H12O5

熔点N/A

结构特性

FITC是荧光素的异硫氰酸酯衍生物，其中异硫氰酸酯基团（–N=C=S）赋予其与伯胺（–NH₂）反应的能力。这种反应通常在碱性条件（pH 8.0~9.0）下进行，可与氨基形成稳定的硫脲键，从而实现分子的共价标记。

FITC有两种异构体：5-FITC 和 6-FITC，其中5-FITC是常用的异构体，也常作为标准试剂销售。商业上提供的“FITC”通常是5-FITC和6-FITC的混合物。

反应活性与标记机制

FITC中的异硫氰酸酯基团可与伯胺类分子迅速反应，在温和条件下形成稳定的硫脲键。这使其成为标记蛋白质、抗体和寡核苷酸的理想选择。该反应步骤简便高效，常用缓冲液为碳酸氢盐缓冲液（pH 8.3）或磷酸盐缓冲液（PBS，调节至碱性）。

标记完成后，通常需要透析、凝胶过滤或HPLC等手段去除未反应的FITC游离染料，以减少背景信号。

主要应用领域

免疫荧光染色（Immunofluorescence, IF）
FITC可用于标记抗体，用于检测细胞或组织中的特定靶标。由于其绿色荧光信号清晰明亮，可被多种荧光显微镜检测系统识别。

流式细胞术（Flow Cytometry, FACS）
FITC标记抗体广泛用于流式细胞术中，用于检测细胞表面或胞内蛋白，便于实现细胞亚群分析或细胞活性评估。

蛋白质/多肽标记
FITC常用于标记酶、激素、受体、细胞穿膜肽等，用于追踪其生物分布和作用机制。

细胞追踪和示踪实验
通过FITC标记的物质可用于研究细胞的吞噬、摄取、转运、跨膜过程等。

荧光探针和传感器构建
FITC经常用于合成荧光比率探针或用于检测离子、pH、酶活性的传感系统。

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