Sulfo-Cyanine5 dUTP 是一种结合了Sulfo-Cyanine5(磺化Cyanine5)荧光染料和脱氧尿苷三磷酸(dUTP)的荧光标记核苷酸。该分子专为DNA酶反应及DNA合成过程中掺入而设计,能够在DNA分子中以替代普通的dTTP形式被DNA聚合酶有效整合。掺入Sulfo-Cyanine5 dUTP的DNA片段会发射鲜明的远红色荧光,便于实现高灵敏度的检测和成像。
化学结构及特性
染料部分:Sulfo-Cyanine5是一种水溶性良好、极具光稳定性的红色荧光染料,激发波长约为650 nm,发射波长约为670 nm。磺酸基团赋予该染料优异的水溶性及低非特异性结合,适合在复杂生物体系中使用。
核苷酸部分:dUTP结构允许该分子被DNA聚合酶作为替代碱基掺入DNA链中。
连接方式:荧光染料通过稳定的共价键连接于dUTP分子,使得掺入的核苷酸既保持生物活性,又具备荧光标记功能。
应用原理及功能
Sulfo-Cyanine5 dUTP可在多种DNA合成反应中被掺入,包括:
体外DNA合成与扩增:如PCR扩增、末端标记、酶催化合成等
DNA酶标记:DNA聚合酶在扩增过程中掺入Sulfo-Cyanine5 dUTP,使产物带有红色荧光标签
荧光原位杂交(FISH):标记探针的合成,方便探测细胞核内特定DNA序列
DNA损伤和修复研究:追踪新合成的DNA链及修复过程
优势特点
高灵敏度荧光检测:远红色发射减少了生物样品自发荧光干扰,提高信噪比
水溶性好、稳定性强:磺酸基团确保在水相体系中分散均匀且染料不易光漂白
兼容多种酶反应体系:可被多种DNA聚合酶识别并有效掺入DNA链
简化实验流程:直接掺入法减少了传统标记过程中的复杂步骤
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