产品名称:CY3/Cy5-Insulin-Biotin的应用场景
一、合成方法
以CY3-Insulin-Biotin为例,典型合成步骤如下:
胰岛素还原
胰岛素溶解于Tris-HCl缓冲液(pH 8.0),加入DTT还原二硫键,暴露巯基。
CY3标记
还原型胰岛素与CY3-马来酰亚胺反应,形成硫醚键,标记效率约80%。
生物素标记
标记后的胰岛素与Biotin-NHS酯反应,形成酰胺键,标记效率约90%。
纯化与验证
通过HPLC纯化,质谱确认分子量,荧光光谱仪验证激发/发射波长,圆二色光谱评估胰岛素二级结构完整性(α-螺旋含量>50%)。
二、应用场景
胰岛素追踪与可视化
观察胰岛素在细胞内的摄取、分布及代谢过程,研究糖尿病相关机制。
蛋白质相互作用分析
结合流式细胞术或免疫共沉淀,分析胰岛素与其他蛋白(如受体)的相互作用。
分子固定与纯化
利用生物素-链霉亲和素系统,将胰岛素固定在固相载体上,用于受体结合实验或抗原捕获。
多色荧光成像
在组织切片或活细胞中同时标记胰岛素和其他分子(如葡萄糖转运蛋白),揭示空间共定位关系。
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