产品名称：亲和纯化蛋白标签6xHis的优化策略

优化策略

减少非特异性结合

增加洗涤步骤：使用高盐（500 mM NaCl）或低浓度咪唑（50 mM）洗涤。

添加去垢剂：如0.1% Tween-20或CHAPS，减少疏水相互作用。

提高结合效率

优化pH：大肠杆菌表达蛋白通常在pH 8.0结合，哺乳动物细胞蛋白在pH 7.0-7.5。

降低流速：缓慢上样（0.2-0.5 mL/min）可增强结合。

标签位置与去除

标签位置：N端标签可能影响蛋白分泌，C端标签更适用于分泌表达。

标签切除：用凝血酶（Thrombin）或TEV蛋白酶在特定位点切割标签，需在标签与目标蛋白间设计酶切位点（如LEVLFQGP）。

处理包涵体

变性复性：用8 M尿素或6 M盐酸胍溶解包涵体，再通过透析或稀释逐步复性。

添加还原剂：如DTT或β-巯基乙醇，防止二硫键错误配对。

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