花菁素染料Cyanine标记丝素蛋白 CY5-Silk fibroin的实验步骤

实验步骤

丝素蛋白的预处理

溶解：将丝素蛋白溶解于适当的缓冲液（如PBS）中，浓度通常为1-10 mg/mL。

纯化：通过透析或柱层析去除杂质，确保丝素蛋白的纯度。

Cyanine染料的活化

NHS酯活化：将Cyanine染料的NHS酯溶解于无水DMF或DMSO中，加入三乙胺（TEA）作为催化剂，室温避光反应30分钟。

偶联反应

条件：将活化的Cyanine染料与丝素蛋白在弱碱性条件（pH 8.0-9.0）下混合，室温避光搅拌4-8小时。

摩尔比：Cyanine染料与丝素蛋白的摩尔比通常为1:1至5:1，确保高效标记。

纯化

透析：使用截留分子量适当的透析袋（如30 kDa），去除未反应的Cyanine染料和其他小分子杂质。

柱层析：通过凝胶渗透色谱（GPC）进一步纯化，确保产物的纯度。

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