产品名称:Dextran-CY5,葡聚糖-花菁素CY5的合成与纯化
合成与纯化
合成步骤
葡聚糖修饰(以氨基化为例):
还原胺化:将葡聚糖与乙二胺在酸性条件(如乙酸)下反应,羟基与乙二胺的氨基发生还原胺化,生成氨基化葡聚糖(Dextran-NH₂)。
纯化:通过旋转蒸发去除未反应的乙二胺,再用透析(截留分子量1,000 Da)去除小分子副产物。
CY5偶联:
活化CY5:CY5粉末溶解于无水DMSO或DMF中,配制成高浓度储备液(10-20 mg/mL)。
偶联反应:氨基化葡聚糖溶解于碳酸盐缓冲液(pH 9.5),加入CY5溶液,室温避光反应2-4小时,确保氨基与NHS酯充分反应。
反应终止:加入甘氨酸(Glycine)淬灭未反应的CY5,避免过度标记。
纯化方法
透析:使用截留分子量10,000-30,000 Da的透析袋,去除未反应的CY5、甘氨酸及小分子副产物,更换缓冲液(如PBS)3-5次。
凝胶过滤层析:通过Sephadex G-50或G-75柱进一步纯化,分离Dextran-CY5与未偶联的葡聚糖或CY5。
表征:通过荧光光谱(验证CY5特征发射峰670 nm)、凝胶渗透色谱(GPC,检测分子量分布)及紫外-可见光谱(葡聚糖特征吸收峰280 nm)确认标记效率及产物纯度。
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