产品名称：FITC-Biotin，异硫氰酸荧光素标记生物素的反应条件

一、化学结构与组成

1. 化学结构

FITC（异硫氰酸荧光素）：

分子式：C₂₁H₁₂NO₅S，分子量约389.4 g/mol。

功能：提供绿色荧光（激发波长495 nm，发射波长519 nm），用于荧光标记。

生物素（Biotin）：

分子式：C₁₀H₁₆N₂O₃S，分子量约244.31 g/mol。

功能：与亲和素/链霉亲和素高亲和力结合（Kd≈10⁻¹⁵ M），实现靶向识别。

连接方式：

FITC的异硫氰酸酯基团（-N=C=S）与生物素的氨基反应，形成稳定的硫脲键（-NH-C(=S)-NH-）。

整体分子式：C₄₂H₅₀N₆O₈S₂，分子量约831.02 g/mol（含连接臂）。

2. 结构示意图

Biotin-NH₂ + FITC-N=C=S → Biotin-NH-C(=S)-NH-FITC

二、合成方法

1. 反应条件

步骤：

生物素溶解在弱碱性缓冲液（如PBS，pH 7.4）中。

加入FITC，室温反应2-4小时。

反应式：Biotin-NH₂ + FITC-N=C=S → Biotin-NH-C(=S)-NH-FITC + H₂S↑。

关键参数：

pH值：7-9（弱碱性环境促进氨基反应）。

温度：室温（25℃）反应，避免高温导致荧光淬灭。

摩尔比：FITC与生物素的摩尔比通常为1:1至2:1，以平衡标记效率与产物纯度。

2. 纯化方法

透析：使用截留分子量3.5 kDa的透析袋，去除未反应的FITC和副产物。

凝胶过滤色谱：如Sephadex G-25，进一步纯化目标产物。

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