Biotin-SS-Tyramide，又称生物素-酪酰胺-二硫键衍生物，是一种广泛应用于生物素酶促沉积信号放大（TSA, Tyramide Signal Amplification）技术中的高灵敏度化学探针。

其分子结构中同时包含生物素基团、酪酰胺结构以及一个可还原的二硫键（SS键），具备高亲和力、生物可切割性和酶促反应活性三重功能特性，使其成为一种标记物质，广泛应用于免疫组化、原位杂交、蛋白质组学、细胞成像等分子生物学和生物医学研究领域。

结构与组成

Biotin-SS-Tyramide 主要由以下三个功能区组成：

生物素基团（Biotin）：为小分子维生素，能与亲和素（Avidin）或链霉亲和素（Streptavidin）形成高度特异的非共价键结合，其亲和常数约为 10⁻¹⁵ M，为目前已知最强的非共价生物结合之一。此基团使得Biotin-SS-Tyramide能够用于信号放大与后续检测，例如与辣根过氧化物酶（HRP）耦合的二抗或荧光标记的链霉亲和素结合进行显色或荧光成像。

酪酰胺（Tyramide）：是HRP酶促反应的底物。当HRP存在并且加入过氧化氢（H₂O₂）后，酪酰胺被催化活化，形成高度活泼的自由基，这些自由基会迅速与近邻的酪氨酸残基共价结合，从而实现“原位沉积”，即目标区域富集信号分子。

二硫键（SS）连接臂：连接酪酰胺与生物素的化学桥段，是一种可被还原剂（如DTT，TCEP）断裂的化学键。此功能可实现信号的“可逆性”调控。例如，在特定条件下通过还原二硫键释放生物素，实现信号的可控释放或二次利用，增加了实验设计的灵活性。

工作原理与应用

Biotin-SS-Tyramide 的工作机制依托于 TSA系统，该系统以HRP为催化剂，将酪酰胺衍生物在目标区域（如抗体、探针结合位置）原位沉积，从而显著放大检测信号。

1. 信号放大原理：

HRP催化Biotin-SS-Tyramide氧化生成自由基

自由基与靠近HRP的酪氨酸残基共价结合

生物素被沉积在目标区域，后续可与荧光链霉亲和素、金标链霉亲和素等进行可视化检测

每个HRP分子可催化多个Biotin-SS-Tyramide分子，极大提高信号强度

2. 应用场景：

免疫组织化学（IHC）：用于低丰度蛋白的高灵敏检测

原位杂交（ISH）：尤其适合检测少量mRNA或lncRNA

高分辨率细胞成像：配合共聚焦或超分辨显微镜进行空间定位

蛋白互作研究：用于 proximity labeling 和信号定位

可控放大实验：二硫键裂解可用于对比实验设计，增强数据可信度

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