文献：利用双色荧光波动光谱和共聚焦成像研究聚合物-寡核苷酸复合物的细胞内解离

链接：https://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/bi0476883

作者：B. 卢卡斯K. 雷毛特NN桑德斯K. 布雷克曼斯SC德施梅特J. 德米斯特

节选：

为了转染细胞，阳离子聚合物和阳离子脂质体被广泛研究用作寡核苷酸和质粒DNA的载体。DNA成功递送至细胞内的关键步骤是从载体中释放出来。本研究探索了双色荧光波动光谱（双色FFS），以表征阳离子聚合物/寡核苷酸复合物的细胞内解离。作为模型，将罗丹明绿标记的寡核苷酸（RhGr-ONs）与高摩尔质量（Cy5-接枝-pDMAEMA，1700 kDa）或低摩尔质量[Cy5-聚（l-赖氨酸），Cy5-pLL，30 kDa]的Cy5标记聚合物复合。将FFS结果与共聚焦激光扫描显微镜（CLSM）的观测结果进行了比较。 CLSM 证明，被 Vero 细胞内吞的 Cy5 - graft -pDMAEMA/RhGr-ON 复合物在细胞质中解离：聚合物仅在细胞质中检测到，而（释放的）RhGr-ON 积累在细胞核中。然而，用 Cy5-pLL/RhGr-ON 复合物转染 Vero 细胞会导致聚合物和寡核苷酸在细胞核内共定位。在后一种情况下，CLSM 无法证明完整的 Cy5-pLL/RhGr-ON 复合物是否存在于细胞核中，或者两种成分是否一起位于细胞核中而不结合。双色 FFS 可以监测（双标记）荧光分子的运动，从而回答这个问题。由于 Cy5-pLL/RhGr-ON 复合物是多分子的，即它由许多与许多 Cy5-pLL 链结合的 RhGr-ON 组成，因此它同时具有强烈的绿色和红色荧光。因此，当 Cy5-pLL/RhGr-ON 复合物穿过激发体积时，FFS 仪器的（绿色和红色）检测器会同时检测到强烈的绿色和红色荧光峰。将 Cy5-pLL/RhGr-ON 复合物转染 Vero 细胞后，FFS 确实能够同时检测到细胞质中的绿色和红色荧光峰，但从未检测到细胞核中的荧光峰。由此我们得出结论，转染后细胞核中的 Cy5-pLL 和 RhGr-ON 之间没有关联。

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