产品名称:CY5标记伊维菌素的实验步骤
一、实验步骤
1. 材料准备
试剂:
CY5-NHS酯(如Sulfo-CY5 NHS酯,水溶性更佳)。
伊维菌素原料药。
有机溶剂(DMF、DMSO)。
缓冲液(PBS,pH 7.4)。
设备:
高效液相色谱(HPLC)用于纯化与验证。
荧光光谱仪、质谱仪。
2. 反应流程
步骤1:溶解伊维菌素
将伊维菌素溶于DMF或DMSO中,浓度约为5-10 mg/mL。
步骤2:激活CY5-NHS酯
将CY5-NHS酯溶于DMF中,浓度约为1-5 mg/mL。
步骤3:偶联反应
将CY5溶液缓慢加入伊维菌素溶液中,室温下搅拌反应2-4小时。
步骤4:终止反应
加入过量甘油或Tris缓冲液终止反应。
3. 纯化与验证
纯化方法:
HPLC:使用C18柱,流动相为乙腈/水(含0.1% TFA),梯度洗脱分离未反应的CY5与标记产物。
透析法:将反应液装入透析袋(MWCO 1000-3000),用PBS透析24小时,去除小分子杂质。
验证手段:
荧光光谱:检测标记产物在670 nm处的荧光发射峰。
质谱(MS):确认分子量增加(CY5分子量≈750 Da)。
HPLC:纯度分析,确保无未反应的CY5残留。
4. 生物活性验证
体外实验:
将标记后的伊维菌素与寄生虫(如线虫)共培养,观察其驱虫活性是否保留。
体内实验:
小鼠模型中检测荧光信号分布,并与未标记伊维菌素的药效对比。
二、应用场景
1. 生物成像
活体成像:利用CY5的近红外特性,追踪伊维菌素在动物体内的分布与代谢。
细胞实验:荧光显微镜观察伊维菌素在细胞内的摄取与定位。
2. 药物递送研究
靶向验证:结合特定受体(如GABA受体),研究伊维菌素的靶向性。
载体开发:将标记产物用于脂质体或纳米颗粒的制备,优化药物递送系统。
3. 药代动力学研究
定量分析:通过荧光强度测定伊维菌素在血液或组织中的浓度。
代谢路径:追踪伊维菌素在体内的代谢产物与排泄途径。
温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh
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