CY3-SODN19,CY3标记寡脱氧核苷酸的反应条件
Cy3-SODN19是标记有Cy3荧光染料的寡脱氧核苷酸(SODN)19碱基长度的寡核苷酸,主要用于分子探针和基因表达分析。其制备过程中关键的反应条件确保标记效率和分子稳定性。
反应条件详述:
标记位点设计
SODN19通常在5’端或3’端引入氨基修饰核苷,为Cy3-NHS酯的酰胺化反应提供活性位点。
溶液环境
反应缓冲液常用碳酸盐缓冲液(pH 8.0-8.5),保持适宜的碱性环境促进氨基与NHS酯反应。
反应体系中SODN19浓度一般控制在0.1-1 mM。
荧光染料准备
Cy3-NHS酯溶解于干燥的有机溶剂如DMSO,避免水分导致酯基水解,保证反应活性。
反应温度与时间
反应通常在室温(20-25℃)条件下进行,避光环境减少光降解。
反应时间一般为1-4小时,根据反应效率可适当调整。
反应摩尔比
Cy3-NHS酯与SODN19的摩尔比常设为1.5-3倍,以确保充分标记。
过量染料有利于标记完成,但需后续纯化去除游离染料。
终止反应
反应结束后加入含有胺基的缓冲液(如Tris)终止未反应的NHS酯,防止非特异性反应。
纯化
通过高效液相色谱(HPLC)或凝胶过滤去除游离染料和副产物,获得纯度高的Cy3-SODN19。
纯化后通过紫外-可见吸收和荧光光谱确认标记成功。
储存
标记寡核苷酸在-20℃避光保存,防止荧光衰减和分子降解。
产品名称:CY3-SODN19
纯度:95%+
规格:mg/g
用途:科研
状态:固体/粉末/溶液
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仅用于科研,不能用于人体。小编axc