AF 488 COOH,全称为 Alexa Fluor 488 Carboxylic Acid,是一种绿色荧光染料 Alexa Fluor 488 的羧酸形式,是当今生命科学研究和生物标记领域中广泛应用的荧光探针之一。
作为水溶性、光稳定性高且生物相容性优良的荧光分子,AF488 COOH 常被用于制备活性酯、偶联抗体或蛋白质,以及开发荧光探针、纳米颗粒标记物等,是多种生物标记和成像方案中的核心原料。
应用领域
AF 488 COOH 在生物医学、细胞生物学以及材料科学领域有着广泛应用,以下为其主要用途:
1. 活性酯衍生化
通过化学活化手段(如 EDC/NHS 反应),AF 488 COOH 可转化为 NHS 酯形式(AF 488 NHS ester),进而与蛋白质、抗体、寡核苷酸、聚合物、纳米材料等含伯胺官能团的分子进行高效偶联。这种偶联方式广泛用于构建靶向探针、荧光标记抗体或药物递送系统。
2. 纳米材料表面修饰
AF 488 COOH 可被修饰到纳米粒子表面,如二氧化硅纳米颗粒、聚合物胶束、金属纳米颗粒等,用于活体成像、细胞追踪以及靶向递送系统的构建。通过羧酸基团的偶联,可实现多价标记或靶向配体的多重修饰。
3. 制备共轭荧光探针
研究人员可通过 AF488 COOH 合成分子探针,如与糖类、脂质或小分子结合,构建对特定受体或酶有识别能力的荧光探针,广泛用于细胞识别、信号通路研究和药物筛选。
4. 多重荧光标记实验
AF 488 的绿色荧光使其适合用于多重荧光实验,与如 AF594、AF647 等红色或远红荧光染料搭配,在免疫荧光、FACS(流式细胞术)、共聚焦显微镜等实验中实现多色成像。
偶联策略及操作要点
虽然AF 488 COOH本身不能直接与生物分子偶联(需要活化),但通过以下策略可快速实现高效连接:
EDC/NHS 体系活化
常用水相活化方法,EDC将羧酸活化为中间体,然后NHS加入形成稳定的NHS酯。随后,该NHS酯可与胺基反应形成稳定的酰胺键。
反应条件控制
推荐在pH 6.0–7.5的缓冲液中进行EDC/NHS反应,偶联反应则在pH 7.5–8.5中进行。需避免使用含伯胺(如Tris)的缓冲液,以免竞争反应。
储存与稳定性
避光保存:强光会导致荧光分子结构破坏,应在避光条件下操作;
低温保存:建议 -20°C 保存,防止水解或氧化;
短期溶液使用:AF 488 COOH 溶液在水中不稳定,建议现配现用,尤其是活化酯形式更易水解。
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