Cyanine2 NHS Ester(Cy2 NHS Ester)是一种绿色荧光染料的活性酯形式,广泛应用于生物分子的共价标记,特别是蛋白质、肽、核酸、糖类等含伯胺基团的分子。
其结构来源于Cyanine2染料家族,通过连接N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯基团,使得该染料在生物标记和荧光成像方面具有优异的反应性和光学性能。
英文名 CY2-SE
CAS号 186205-33-4
分子量 643.469
分子式 C29H30IN3O6
熔点 N/A
反应活性与偶联机理
Cyanine2 NHS Ester 的NHS酯基团是非常常见的伯胺偶联基团,可在中性或弱碱性(pH 7.5–8.5)条件下与蛋白质或其他生物分子上的伯胺(–NH₂)反应,生成稳定的酰胺键。这一反应机制具有以下特点:
高专一性:主要与伯胺反应,不易与其他官能团交叉反应;
反应温和:无需使用催化剂或强碱;
偶联效率高:在适宜条件下反应速率快,通常几小时内即可完成;
生成产物稳定:生成的酰胺键在生理条件下非常稳定。
应用领域
1. 蛋白质和抗体标记
Cy2 NHS Ester广泛用于蛋白质(如IgG、BSA等)的荧光标记,可用于后续的免疫荧光(IF)、免疫沉淀(IP)、免疫印迹(Western blot)等实验。
2. 核酸和寡核苷酸标记
通过与含氨基修饰的寡核苷酸进行偶联,实现核酸探针的构建,适用于荧光原位杂交(FISH)或实时荧光PCR等分子生物学应用。
3. 细胞标记与成像
Cy2标记的分子探针可用于活细胞或固定细胞的成像研究,如细胞器定位、膜标记、胞吞路径研究等。
4. 流式细胞术(FACS)
Cy2-labeled抗体可用于流式分析中绿色通道检测,是FITC的理想替代者,具有更高的光稳定性。
5. FRET实验
Cy2作为供体染料可用于FRET研究,常与Cy3、Cy5等染料组合用于探测分子间相互作用。
6. 功能材料修饰
如用于纳米粒子、聚合物、生物传感器材料的荧光功能化,用于构建可视化诊断与监测系统。
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