AF488 NHS Ester，即 Alexa Fluor 488 N-羟基琥珀酰亚胺酯，是一种基于高性能荧光团Alexa Fluor 488的活性酯标记试剂。Alexa Fluor 488（简称AF488）属于磺基荧光染料家族，是一种具有优异光学性能和化学稳定性的绿色荧光染料。

NHS酯的活性结构使其能够高效地与蛋白质、肽、抗体、核酸等生物大分子的伯胺基团形成共价键，广泛应用于生物标记、细胞成像、流式细胞术以及免疫分析等研究领域。

偶联反应机制

AF488 NHS Ester利用其活性的NHS酯基团与靶分子中的伯胺基团（如蛋白质中赖氨酸侧链的氨基）进行亲核取代反应，生成稳定的酰胺键，实现共价标记。

反应条件：通常在pH 7.4–8.5的缓冲液（如PBS、碳酸氢盐缓冲液）中进行

反应时间：室温下反应30分钟至1小时

反应特点：高效、专一，反应温和，避免靶分子结构破坏

注意事项：反应过程中应避免游离氨基和水分过多以防NHS酯水解

应用

蛋白质标记
AF488 NHS Ester可标记蛋白质上的赖氨酸残基，用于免疫荧光染色、蛋白定位、Western blot分析和亲和纯化。

抗体偶联
标记一抗或二抗，获得荧光抗体，广泛应用于免疫组化（IHC）、免疫荧光（IF）及流式细胞术（FACS）。

核酸探针制备
与含氨基修饰的寡核苷酸结合，制备高灵敏度的荧光探针，用于荧光原位杂交（FISH）和PCR探针。

细胞成像
利用其绿色荧光信号标记细胞膜、胞器或特定蛋白，实现多色荧光共聚焦显微镜成像。

生物传感器和分子相互作用
标记分子用于研究蛋白-蛋白、蛋白-核酸等生物大分子的相互作用及动力学。

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