产品名称：Biotin-cRGD，生物素-环肽的合成方法

合成方法

（1）固相合成法（SPPS）

步骤1：合成cRGD多肽

树脂选择：

Rink Amide树脂：生成C端酰胺（c(RGDfK)-NH₂）。

Wang树脂：生成C端羧酸（c(RGDfK)-COOH）。

氨基酸偶联：

依次偶联Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-D-Phe-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH等。

环化：在赖氨酸侧链氨基与天冬氨酸羧基之间形成内酰胺键（使用HATU/DIPEA活化）。

切割树脂：

TFA/TIS/H2O（95:2.5:2.5）切割，得到c(RGDfK)-NH₂或c(RGDfK)-COOH。

步骤2：生物素修饰

方法1：直接修饰cRGD的氨基

生物素羧酸（Biotin-COOH）与c(RGDfK)-NH₂通过EDC/NHS活化反应：

溶解Biotin-COOH（1 eq）和EDC（1.5 eq）在DMF中，室温搅拌30分钟。

加入NHS（1.5 eq），继续反应30分钟。

加入c(RGDfK)-NH₂（1 eq），pH 7.5-8.0，室温反应过夜。

HPLC纯化，得到Biotin-c(RGDfK)。

方法2：通过连接臂修饰

先合成Biotin-PEG₄-NHS（商业可购），再与c(RGDfK)-NH₂反应：

溶解Biotin-PEG₄-NHS（1 eq）和c(RGDfK)-NH₂（1.2 eq）在PBS（pH 7.4）中。

室温反应2小时，HPLC纯化。

（2）液相合成法

适用于小规模合成或复杂修饰：

预先合成生物素-PEG₄-COOH，再通过EDC/NHS与c(RGDfK)-NH₂偶联。

优势：可精确控制反应条件（如pH、温度），减少副产物。

（3）纯化与表征

纯化：

反相HPLC（C18柱）：分离未反应的生物素或cRGD。

分子筛层析（如Sephadex G-15）：去除小分子杂质。

表征：

质谱（MS）：确认分子量（如Biotin-c(RGDfK)的理论分子量≈1200 Da）。

HPLC保留时间：与未修饰cRGD对比，验证纯度（>95%）。

生物素活性检测：通过ELISA或荧光极化实验验证与链霉亲和素的结合能力。

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！wyh

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