产品名称：Cy5.5-Protein A，花菁素染料cy5标记蛋白A的操作步骤

操作步骤

Protein A准备：

将Protein A溶液（1 mg/mL）用PBS（pH 7.4）透析过夜，去除潜在杂质。

Cy5.5-NHS溶解：

将Cy5.5-NHS粉末溶于无水DMSO（10 mg/mL），避光保存（Cy5.5-NHS在水中易水解）。

标记反应：

将Cy5.5-NHS溶液逐滴加入Protein A溶液中（Cy5.5-NHS:Protein A=5:1摩尔比），轻轻混匀。

室温避光搅拌1小时（或4℃过夜，反应更温和）。

终止反应：

加入10 μL 1 M Tris-HCl（pH 8.0）淬灭未反应的Cy5.5-NHS（Tris的氨基可竞争性结合Cy5.5-NHS）。

纯化：

凝胶过滤层析：

使用Sephadex G-25柱，以PBS为流动相，分离Cy5.5-Protein A与未反应的Cy5.5-NHS。

透析：

将反应液装入透析袋（MWCO 10 kDa），对PBS透析3次（每次4小时），去除小分子杂质。

浓度测定：

Bradford法：测定Protein A浓度（A₅₉₅）。

紫外光谱法：

A₆₇₅（Cy5.5）/A₂₈₀（Protein A）比值计算标记效率。

示例：若A₆₇₅=0.8，A₂₈₀=1.0，则标记比例≈4 Cy5.5/Protein A。

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！wyh

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