CY5.5-Streptavidin，CY5.5标记链霉亲和素的反应条件

CY5.5-Streptavidin 是通过将近红外荧光染料 CY5.5 共价标记至链霉亲和素（Streptavidin）分子上的复合物，常用于荧光免疫检测、核酸杂交、蛋白质印迹和体内成像等生物实验中。链霉亲和素具有高度特异性地与生物素（Biotin）结合的能力，而CY5.5染料则提供了近红外荧光信号，二者结合可实现目标分子高灵敏度的可视化检测。

CY5.5 通常以 NHS 酯的形式进行修饰。NHS酯活性高，能够与蛋白质中的伯胺基团（主要来源于赖氨酸残基）在温和条件下发生酰胺键连接，实现共价标记。CY5.5-Streptavidin 的制备反应条件如下：

缓冲体系选择：反应通常在碳酸氢钠缓冲液（NaHCO₃，pH 8.3–8.5）或磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.8–8.2）中进行。碱性环境有利于赖氨酸的伯胺基去质子化，提高亲核活性。避免使用含有伯胺类物质（如Tris缓冲液），以免与NHS酯竞争反应。

蛋白浓度：链霉亲和素溶液浓度控制在1–5 mg/mL较为适宜。蛋白过稀不利于反应效率，浓度过高则可能导致染料不均匀结合。

CY5.5-NHS 酯的准备：CY5.5-NHS酯需现用现配，通常溶于无水DMSO或DMF中，浓度约为1–10 mM。应缓慢加入蛋白溶液中，避免局部浓度过高造成蛋白聚集或变性。

摩尔比例控制：染料与蛋白的摩尔比例常设定在3:1到10:1之间，具体比例需依据所需标记程度与荧光强度调节。过度标记可能导致蛋白构象改变或功能丧失。

反应温度与时间：反应在避光条件下，于室温（20–25°C）下进行，持续30分钟到2小时。避光操作防止CY5.5光降解，维持其荧光活性。

终止与纯化：反应结束后，通常加入甘氨酸或乙醇胺终止残余NHS酯反应。随后使用凝胶过滤（如 Sephadex G-25）或超滤离心（10–30 kDa MWCO）去除游离染料与小分子杂质。

质量控制与表征：纯化后使用紫外-可见分光光度计检测吸收峰（CY5.5的λmax ~675 nm）以及蛋白吸收（280 nm），计算D/P比（Dye to Protein Ratio），并通过SDS-PAGE、电泳与质谱分析确认蛋白完整性与标记效率。

储存条件：CY5.5-Streptavidin 可在4°C下短期保存，长期建议加入甘油（20%）或冻干后避光保存于–20°C以下。

综上所述，CY5.5-Streptavidin 的标记过程需严格控制反应pH、温度、时间和染料比例，以确保荧光强度与蛋白功能兼顾，是构建多功能荧光生物探针的关键步骤之一。

产品名称：CY5.5-Streptavidin，CY5.5标记链霉亲和素

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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