Cy5.5标记β2微球蛋白，Cy5.5-β2-microglobulin的合成及纯化过程

β2-微球蛋白（β2-microglobulin，β2-MG）是一种轻链血浆蛋白，分子量约11.8 kDa，是内重要的免疫调节因子。Cy5.5标记β2-微球蛋白的合成及纯化过程涉及高效偶联、纯化分离和质量检测，确保获得结构完整、功能活性的标记产物。

合成过程

原料准备：

高纯度β2-MG蛋白溶解于缓冲液（如PBS，pH 8.0），保证蛋白稳定性。Cy5.5-NHS酯溶于无水DMSO中制备储备液。

偶联反应：

以适当摩尔比（如1:2至1:5，蛋白:染料）将Cy5.5-NHS酯缓慢滴加至β2-MG溶液中，反应在4℃至室温下缓慢摇晃，时间约2–4小时。反应介质pH保持在8.0左右以确保氨基的活性。

反应机理：

Cy5.5-NHS酯与β2-MG的赖氨酸残基ε-氨基发生亲核取代，形成稳定酰胺键，实现荧光标记。该过程无需催化剂，条件温和，有效避免蛋白变性。

反应终止：

加入甘氨酸等游离氨基物质封闭未反应的NHS酯，防止后续反应，稳定标记产物。

纯化过程

透析或凝胶过滤：

采用透析（MWCO 3-10 kDa）或凝胶过滤柱（如Sephadex G-25）去除游离未反应染料和小分子杂质，获得粗纯品。

高效液相色谱（HPLC）纯化：

进一步利用反相HPLC（RP-HPLC）纯化，采用C18柱，梯度洗脱（乙腈-水，含微量TFA）分离标记蛋白与未标记蛋白及副产物。监测波长设为280 nm（蛋白）及675 nm（Cy5.5），确认纯品峰。

纯品收集及浓缩：

收集目标峰，冷冻干燥得到纯度高、稳定的Cy5.5-β2-MG固体产物。

质量控制

质谱分析：确认标记分子量与理论值吻合，验证偶联成功。

UV-Vis和荧光光谱：检测Cy5.5的吸收峰和荧光发射，评估染料活性和偶联效率。

SDS-PAGE及免疫印迹：验证蛋白完整性和标记情况。

产品名称：Cy5.5标记β2微球蛋白，Cy5.5-β2-microglobulin

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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