Cy5.5-Ceruloplasmin，CY5.5标记铜蓝蛋白的反应步骤

铜蓝蛋白（Ceruloplasmin，CP）是一种含铜酶，主要参与体内铁代谢和氧化还原反应。Cy5.5标记铜蓝蛋白是将近红外荧光染料共价连接至CP分子，用于生物成像及功能研究。以下为Cy5.5-CP的标记反应步骤及要点。

材料准备

纯化铜蓝蛋白溶液，浓度一般为1-10 mg/mL，缓冲液为PBS（pH 7.4-8.0）。

Cy5.5-NHS酯染料，储存于无水避光条件。

反应缓冲体系需保证蛋白质稳定且适合NHS酯反应。

反应条件优化

反应体系一般选择pH 7.5-8.5的碳酸氢盐缓冲液或PBS，保证蛋白质稳定且NHS酯活性。反应温度控制在室温或4℃，避免蛋白质变性。

偶联反应步骤

将铜蓝蛋白溶液缓慢加入预先溶解于干燥溶剂（如DMSO）的Cy5.5-NHS酯溶液中。

控制Cy5.5与CP的摩尔比，通常为5:1至20:1，避免过度标记导致蛋白失活。

轻柔混合，反应时间一般为1-4小时，期间保持缓冲体系稳定。

反应终止及游离染料去除

反应结束后，加入过量的甘氨酸或Tris缓冲液以中和未反应的NHS酯，终止反应。

通过透析、凝胶过滤色谱或超滤分离自由染料和小分子杂质，纯化标记产物。

纯化与浓缩

采用超滤装置或透析袋，将标记蛋白浓缩至所需浓度。

可利用凝胶过滤层析进一步提高纯度，去除部分聚集体和未标记蛋白。

产品表征

使用紫外-可见分光光度计检测Cy5.5和蛋白质的吸收峰，计算标记度。

通过荧光光谱确认荧光特性。

SDS-PAGE电泳检测蛋白完整性及偶联均一性。

质谱和动态光散射（DLS）分析标记产物的分子量和颗粒状态。

功能性检测

测定铜蓝蛋白的氧化酶活性，确认标记过程未损伤酶活。

评估生物相容性及稳定性，确保适用后续生物医学应用。

产品名称：Cy5.5-Ceruloplasmin，CY5.5标记铜蓝蛋白

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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