产品名称：Sulfo-CY3-MAL，磺化CY3-马来酰亚胺的使用方法

使用方法

标记前准备：

目标分子处理：

蛋白质：确保目标蛋白含游离巯基（如还原型谷胱甘肽处理断裂二硫键）。

多肽/核酸：直接使用巯基修饰的多肽或核酸（需验证修饰效率）。

缓冲液选择：

推荐缓冲液：PBS（pH 7.4）、HEPES（pH 7.0）或Tris-HCl（pH 7.5），避免含还原剂（如DTT、β-巯基乙醇）的缓冲液（会竞争反应）。

添加剂：可添加EDTA（1-5 mM）螯合金属离子，减少氧化副反应。

标记反应：

摩尔比：通常Sulfo-CY3-MAL与目标分子的摩尔比为1:1-5:1（过量染料可提高标记效率，但需后续纯化去除未反应染料）。

反应体系：将Sulfo-CY3-MAL溶解于DMSO或DMF（终浓度≤10% v/v），缓慢加入含目标分子的缓冲液中，轻轻混匀后室温孵育。

反应终止：加入过量巯基化合物（如β-巯基乙醇至10 mM）淬灭未反应的马来酰亚胺基团，避免后续副反应。

纯化与验证：

纯化方法：

透析：适用于大分子（如蛋白质）的纯化，去除未反应染料和小分子杂质。

凝胶过滤：使用Superdex 75或200柱分离标记产物与未反应染料。

HPLC：反相HPLC（如C18柱）可高效分离标记多肽或小分子。

验证方法：

荧光检测：通过荧光分光光度计或凝胶成像系统验证标记产物的荧光发射。

SDS-PAGE：对标记蛋白质进行电泳分析，观察荧光条带与蛋白条带是否一致。

质谱：通过MALDI-TOF或ESI-MS确认标记产物的分子量变化。

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！wyh

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