产品名称：CY7-MAL，花菁染料CY7-马来酰亚胺的使用方法

使用方法

标记前准备：

目标分子处理：

蛋白质/多肽：确保目标分子含游离巯基（如半胱氨酸残基）。若巯基被保护（如用TCEP或DTT还原二硫键），需先通过脱盐柱或透析去除还原剂。

细胞/组织：若需活细胞标记，需选择温和的反应条件（如低浓度、短时间）以避免细胞损伤。

缓冲液选择：

推荐缓冲液：PBS（pH 7.4）、HEPES（pH 7.0）或Tris-HCl（pH 7.5），避免含螯合剂（如EDTA）的缓冲液。

添加剂：可添加少量有机溶剂（如DMSO或DMF，终浓度≤5% v/v）提高CY7-MAL的溶解度。

标记反应：

摩尔比：通常CY7-MAL与目标分子的摩尔比为1:1-5:1（过量染料可提高标记效率，但需后续纯化去除未反应染料）。

反应体系：

直接混合：将CY7-MAL溶解于DMSO或DMF（终浓度≤10% v/v），加入含目标分子的缓冲液中，室温孵育30分钟至2小时。

避光操作：CY7对光敏感，需在暗处或黄光下进行反应。

反应终止：

加入巯基封闭剂：如N-乙基马来酰亚胺（NEM，1-5 mM）封闭未反应的巯基，防止副反应。

纯化前处理：通过脱盐柱或透析去除未反应染料和小分子杂质。

纯化与验证：

纯化方法：

透析：适用于大分子（如蛋白质）的纯化，去除未反应染料和小分子杂质。

凝胶过滤：使用Superdex 75或200柱分离标记产物与未反应染料。

HPLC：反相HPLC（如C18柱）可高效分离标记多肽或小分子。

验证方法：

荧光检测：通过荧光分光光度计或凝胶成像系统验证标记产物的荧光发射。

SDS-PAGE：对标记蛋白质进行电泳分析，观察荧光条带与蛋白条带是否一致。

质谱：通过MALDI-TOF或ESI-MS确认标记产物的分子量变化。

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！wyh

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