产品名称:HRP-streptavidin,过氧化物酶(辣根)-链霉亲和素的合成方法:氨基反应偶联策略
1. 合成方法:氨基反应偶联策略
FITC-水解胶原蛋白的合成通常采用一步偶联法,关键步骤如下:
水解胶原蛋白的预处理:
水解胶原蛋白粉末溶解于碳酸盐缓冲液(pH 9.0-9.5),调整浓度至1-10 mg/mL,确保氨基充分暴露(碱性环境提升FITC反应效率)。
FITC的活化与偶联:
FITC粉末溶解于DMSO(二甲基亚砜)中,缓慢滴加至水解胶原蛋白溶液中,室温避光搅拌反应2-4小时。FITC的异硫氰酸基团与胶原蛋白的氨基反应,形成硫代氨基甲酸酯键。
反应式:Collagen-NH₂ + FITC-N=C=S → Collagen-NH-C(=S)-FITC
纯化与表征:
反应液通过透析(MWCO 3-5 kDa)或超滤(10 kDa cutoff)去除未反应的FITC和小分子副产物,冷冻干燥得到FITC-水解胶原蛋白粉末。通过紫外-可见光谱(UV-Vis)(FITC特征吸收峰495 nm)和荧光光谱(激发波长495 nm,发射波长520 nm)验证标记效率,通过SDS-PAGE或质谱(MS)分析胶原蛋白的分子量分布。
2. 作用机制:示踪-粘附-功能调控的关联分析
标记与分布:FITC-水解胶原蛋白通过被动扩散或细胞摄取进入组织或细胞,FITC的荧光信号可实时显示其在细胞质、细胞外基质或生物材料表面的分布。
细胞粘附与相互作用:水解胶原蛋白与细胞表面的整合素受体(如α1β1、α2β1)结合,触发细胞粘附、信号转导(如FAK、ERK通路激活)及细胞行为调控(如增殖、迁移)。
功能效应验证:通过荧光信号与生物学效应(如伤口愈合率、细胞增殖指数)的关联分析,验证水解胶原蛋白的功能(如促再生、抗炎)及FITC标记的影响。
温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh
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