CY5-biotin，CY5标记生物素的合成步骤概述

生物素（Biotin）是一种小分子维生素，分子结构中含噻唑环、内酰胺环及羧基，能够与亲和素（Streptavidin）形成高亲和力非共价复合物。通过Cyanine 5（Cy5）标记形成Cy5-Biotin，可实现荧光示踪，用于蛋白质标记、分子识别及免疫分析。其合成步骤一般包括以下关键环节。

合成步骤概述

活化生物素羧基

生物素的羧基是主要反应位点，通过EDC/NHS化学活化生成NHS酯。具体步骤为：将生物素溶解于适宜缓冲液（如碳酸盐缓冲液，pH 7.5–8.5），加入EDC活化羧基形成O-酰基异脲中间体，再加入NHS生成稳定的活性酯。该步骤生成的生物素-NHS酯可直接用于后续偶联。

Cy5偶联反应

将生物素-NHS酯与Cy5-NH₂在温和条件下混合，通常在室温至25°C，反应1–4小时。胺基作为亲核试剂攻击活性碳，生成稳定酰胺键，实现生物素与Cy5共价结合。偶联过程中可通过摩尔比控制标记度，避免过度标记影响生物素结合能力。

反应终止与粗纯化

偶联反应结束后，体系中存在未反应的Cy5和生物素-NHS酯。通过透析、凝胶过滤或硅胶柱层析去除游离小分子，保留Cy5-Biotin产物。

进一步纯化

高效液相色谱（HPLC）：利用反相C18柱，采用水-乙腈梯度体系分离Cy5-Biotin与未反应生物素及副产物。

荧光检测：通过Cy5荧光信号确认产物位置，确保标记成功。

储存与使用

纯化后的Cy5-Biotin通常溶解于PBS或适宜缓冲液中，避光低温保存。稳定性良好，可长期用于蛋白质偶联、分子识别及荧光成像实验。

总结

Cy5-Biotin的合成通过生物素羧基活化、Cy5胺偶联、透析及HPLC纯化完成。合成步骤温和、高效，保证标记成功的同时保留生物素亲和性，为蛋白质标记、分子识别和荧光示踪实验提供可靠工具。

产品名称：CY5-bioti生物素

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

推荐产品：

CY5-聚乙二醇-重组蛋白G，Cyanine5-PEG-Recombinant Protein G，

CY5-聚乙二醇-转铁蛋白，Cyanine5-PEG-Transferrin，

Cy5-壳聚糖，Cyanine5-Chitosan，

CY5克拉霉素 CY5-Clarithromycin

CY5卵清蛋白 CY5-OVA

仅供科研，不能用于人体实验AXC.2025.06.23