CY7.5-Laminin,CY7.5标记层粘连蛋白的偶联反应步骤主
CY7.5-Laminin是一种将Near-Infrared (NIR) 荧光染料CY7.5与层粘连蛋白(Laminin)偶联形成的功能化蛋白分子,用于体外和体内成像、细胞-基质相互作用研究以及纳米载体表面修饰。层粘连蛋白是重要的细胞外基质蛋白,具有多功能结构域,可与细胞表面受体和其他基质蛋白结合。CY7.5染料的偶联使蛋白具备可视化追踪能力。
偶联反应步骤主要包括以下几个环节:
蛋白溶解与缓冲体系准备
将层粘连蛋白溶解于适宜的缓冲液(通常为pH 7.4~8.0的PBS或碳酸盐缓冲液),以保证蛋白分子保持构象和活性。缓冲体系需去除游离胺或硫醇干扰物,确保偶联效率。
CY7.5活化与偶联
CY7.5染料一般以NHS酯(N-hydroxysuccinimide ester)形式提供,可与蛋白的赖氨酸氨基发生亲核取代反应,形成稳定的酰胺键。将适量CY7.5-NHS加入蛋白溶液中,缓慢搅拌反应数小时(通常4–12小时),控制温度在4–25°C,以维持蛋白稳定性和活性。偶联比例需优化,避免过度修饰导致蛋白构象改变。
反应终止与去除未反应染料
反应结束后,可通过加入甘氨酸或其他氨基化合物终止未反应的活性酯。随后通过透析、凝胶过滤或超滤等方法去除自由染料和小分子副产物,获得纯净的CY7.5-Laminin偶联产物。
产物表征
偶联完成后,可通过紫外-可见吸收光谱、荧光光谱和SDS-PAGE凝胶分析确认染料结合情况和蛋白完整性。荧光峰一般在750–780 nm(吸收)和770–800 nm(发射),反映CY7.5偶联成功且蛋白构象保持稳定。
该偶联步骤确保CY7.5-Laminin既保留蛋白的生物活性,又具备NIR荧光,可用于细胞-基质相互作用研究、纳米载体修饰及体内成像等多种应用。
产品名称:CY7.5-Laminin,CY7.5标记层粘连蛋白
纯度:95%+
性状:固体或液体
储藏条件:-20°C干燥避光保存
包装规格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
厂家:齐岳生物
关于我们
齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务,如活性酯(NHS酯)、马来酰亚胺(MAL)、叠氮(N₃)、炔基(alkyne)等,便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合,实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外,齐岳生物还提供定制染料标记服务,包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物,满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。
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