CY7-lactoferrin，CY7标记乳铁蛋白的合成步骤概述

CY7-lactoferrin 是将近红外花青染料CY7偶联到乳铁蛋白（Lactoferrin, ~80 kDa）表面的可反应侧链上所得的荧光蛋白探针。CY7具有740–760 nm吸收与770–790 nm发射的光谱窗口，能在复杂基质中获得低自发荧光背景与较深的穿透深度；乳铁蛋白则含有多处赖氨酸ε-氨基与少量半胱氨酸/二硫键位点，便于采用胺选择性或硫醇选择性策略实现标记。合理控制标记密度（degree of labeling, DOL）既可保持乳铁蛋白的构象与结合能力，又能获得稳定明亮的近红外信号，适用于载体构建、界面成像与微阵列固定化等研究场景。

合成步骤概述：①缓冲液准备与去盐：将乳铁蛋白（1–5 mg/mL）置换至0.1 M碳酸氢钠缓冲液（pH 8.3）或无胺PBS（pH 7.4），通过脱盐柱或30 kDa超滤去除Tris、胺类稳定剂、叠氮钠与金属螯合剂，避免抑制活性酯反应。②活性酯胺化标记：取CY7-NHS酯（以无水DMSO配制1–10 mM储备液），在避光条件下按CY7：乳铁蛋白摩尔比3–8:1缓慢滴加至蛋白溶液（有机相占比<10%），轻柔混匀，室温反应30–60 min。适量的DIPEA并非必须，通常缓冲液pH已足够提供胺的亲核性。③淬灭与初步纯化：加入终浓度10–20 mM的甘氨酸或Tris淬灭残余NHS酯10 min；随后用Sephadex G-25凝胶过滤或30 kDa超滤（3–5次缓冲置换）去除游离染料与小分子。④细化纯化（可选）：若需更高纯度与单分散性，可采用SEC-HPLC（挥发性盐缓冲、等度或浅梯度）分离不同DOL的组分，收集主峰并立即缓冲置换回储存体系。⑤DOL测定与质量控：记录A280与A750，利用CY7消光系数与乳铁蛋白本征吸收（并做色度学纠正）计算DOL，目标常设在1–3 mol dye/mol protein；进行本征PAGE/SDS-PAGE下的近红外荧光成像与考马斯染色对照，确认无明显聚集或降解；必要时采用DLS评估水合粒径与分散性。⑥替代位点定向策略（可选）：为提高位点选择性，先用Traut’s reagent（2-iminothiolane，pH 7.5，30 min）在赖氨酸上引入巯基，再与CY7-maleimide进行硫-马来酰亚胺加成（pH 6.8–7.2，30–60 min），随后按上述流程纯化与表征。⑦储存：成品避光，4 °C短期保存，长期可经无菌过滤后加入10–20%甘油或少量糖类冷冻保护剂，-20/-80 °C分装冻存，避免反复冻融。上述流程条件温和、通用性强，便于按规模放大并对DOL与构象稳定性实现精细调控。

产品名称：CY7-lactoferrin，CY7标记乳铁蛋白

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

推荐产品：

吲哚菁绿标记生物素 ICG-Biotin

吲哚菁绿标记十九氟癸酸 ICG-Perfluorodecanoic Acid

吲哚菁绿标记水杨酸 ICG-Salicylic acid

吲哚菁绿标记羧基 ICG-COOH 181934-09-8

吲哚菁绿标记羧甲基壳聚糖 ICG-Carboxymethyl chitosan

仅供科研，不能用于人体实验AXC.2025.09