CY7-LPS，CY7脂多糖的合成策略

CY7-LPS 是将近红外染料 Cyanine7 (CY7) 化学或生物正交偶联到脂多糖（LPS，lipopolysaccharide）分子上的荧光探针，目的是在细胞摄取、膜结合和体内分布研究中实现低背景、深穿透的成像。由于 LPS 为复杂的糖脂杂合体（脂 A、核心寡糖与 O-抗原），且含有游离羟基、二醇和若干羧基/磷酸基团，常用的标记策略需考虑保留其构象与促炎活性，同时避免引入会导致聚集或去活化的强有机条件。

合成策略主要有三类：一是碳基羧酸活化法（EDC/NHS）——利用 LPS 核心或 O-抗原上的羧基（例如 Kdo 的终端羧基）与氨基化的接头（如 adipic acid dihydrazide, ADH）形成接合位点，随后用 CY7-NHS 与接入的胺反应生成稳定酰胺键。操作在弱酸到中性水相（pH 5.5–7.4，MES 或 PBS）进行，EDC 用量通常为羧基当量的2–5倍，NHS 或 Sulfo-NHS 增加中间体稳定性，温度 0–4 ℃ 至室温反应 2–12 h，全程避光并轻柔搅拌以减少 LPS 聚集。

二是糖链氧化后肟/肼化学——用亚硫酸钠缓冲的低浓度 NaIO4 温和氧化糖环的二醇位生成醛基（控制时间与温度以避免过氧化脂 A），随后与 aminooxy-CY7（或 hydrazide-CY7）在 pH 4.5–6.0 下做肟缩合或肼缩合，反应通常在室温 1–4 h 完成，生成稳定的肟/肼键。此法位点选择性高、条件温和。三是"点击"化学路由——先在 LPS 上引入短 PEG 链上的叠氮或炔基（经 ADH 或 EDC/NHS 连接），再用 CY7-DBCO 或 CY7-alkyne 在水相进行 SPAAC 或 CuAAC（若用铜催化需严格去除铜离子并避免损伤 LPS）；SPAAC 无需金属、条件温和且适合生物样品。

纯化通常采用多种组合：先用透析（MWCO 3.5–10 kDa）或超滤（30 kDa cutoff 视 LPS 聚合态而定）去除游离染料与低分子副产物；然后用凝胶渗透（Sephadex G-50/G-100）或制备型 SEC 分离不同标记度的组分；必要时用反相或亲水相色谱进一步精制。全程保持低剪切、低温并加入少量非离子表面活性剂（如 0.01–0.05% Tween-20 或 0.05% CHAPS）与低浓度 NaCl 以维持单分散性。

表征手段包括：紫外-可见/荧光光谱（记录 CY7 在 ~750 nm 的吸收与 ~770–790 nm 的发射，借此计算标记度 DOL）；FTIR 可辅助观察新键形成；MALDI-TOF/ESI-MS 对整体 LPS 体系常受限，但可用于核心寡糖或脂 A 片段的鉴定；SDS-PAGE/Tricine-PAGE 联合近红外成像与银染可显示标记后的梯度分布；化学计量学方法（酚-硫酸法测糖含量、磷含量测定）用于校正 DOL 并估算染料与 LPS 的摩尔比。功能性检测建议：比较标记前后 LAL 内毒素活性或体外 TLR4 下游信号（例如 NF-κB 激活）以评估修饰对生物学活性的影响。

储存与稳定性：分装、避光、-20 ℃ 或 -80 ℃ 冷冻保存，避免反复冻融；在生物实验前用短期放置于 4 ℃ 解冻并轻柔混匀。后，标记密度的精细调控是关键——过高 DOL 可改变亲水/疏水平衡导致沉淀或降低活性，建议起始摩尔比小（0.5–2 dye per LPS repeat）并逐步优化。CY7-LPS 在吞噬细胞摄取追踪、炎症部位成像与 LPS-相互作用研究中具有重要应用价值，但在解读生物学数据时须同时考量标记对 LPS 原有功能的潜在干扰。

产品名称：CY7-LPS，CY7脂多糖

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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