英文名 Alexa Fluor 350
常用名 免疫荧光染色试剂盒-抗兔ALEXA FLUOR 350
CAS号 200554-19-4
分子量 410.35
密度 1.74±0.1 g/cm3(Predicted)
分子式 C16H14N2O9S
AF350 NHS 活化酯(Alexa Fluor 350 N-hydroxysuccinimide ester)是 Alexa Fluor 系列中一种短波长蓝色荧光染料的活化形式。该分子在 Alexa Fluor 350 基础上,通过羧基活化生成 NHS 酯(N-羟基琥珀酰亚胺酯),使其能够直接与含有氨基的分子进行共价偶联。
化学上,AF350 NHS 活化酯通过 NHS 酯化反应将羧基转化为易于与一手胺或二手胺反应的活性酯。该酰化反应通常在无水或低水活性的有机溶剂中进行,例如 DMSO 或 DMF,以保持酯的稳定性并提高偶联效率。AF350 NHS 活化酯的优势在于,其反应后生成的酰胺键稳定且不易水解,从而保证标记产物在后续实验中保持结构完整和功能活性。
在应用方面,AF350 NHS 活化酯广泛用于蛋白质、肽链、抗体或其他含氨基的分子标记。由于其短波长激发特性,可与绿光、红光甚至近红外荧光染料同时使用,适合多色荧光成像和多通道分析实验。例如,在流式细胞分析中,AF350 可以与 Alexa Fluor 488、555 或 647 等染料组合,实现多重检测而不产生显著光谱重叠。在荧光显微镜中,AF350 标记的分子可用于观察细胞器、蛋白质定位以及细胞结构研究。
AF350 NHS 活化酯具有良好的水溶性和光稳定性。在标记过程中,通常先将 NHS 酯溶解于有机溶剂中,然后加入含有胺基的目标分子反应。反应条件通常在 pH 7–9 的缓冲液中进行,以确保高效偶联和最小的非特异性副反应。此外,反应完成后,可以通过透析、凝胶过滤或超滤等方法去除未反应的染料,以获得纯净的标记产物。
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