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CY7-EGCG,CY7标记儿茶素的制备方法
发布时间:2025-09-03     作者:axc   分享到:

CY7-EGCG,CY7标记儿茶素的制备方法

CY7-EGCG是以表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)为亲水多酚骨架,外接近红外氰ine7染料(Cy7,λ_abs≈740–760 nm,λ_em≈770–800 nm)的共轭物。EGCG含多酚羟基与C3位没食子酸酯结构,赋予良好的抗氧化与多点氢键作用;Cy7提供强近红外吸收/发射、较高摩尔消光系数与深组织穿透能力。通过在EGCG上引入可控的单一“锚定位点”(优选经C3邻位羟基进行间接衍生化)并接入短链或中等长度PEG间隔臂(如PEG3–PEG8),可在维持水溶性与减少自猝灭之间取得平衡。典型产物在水、PBS及含少量有机助溶剂(DMSO<5%)中可形成分散良好的单体或小聚集体,紫外-可见光谱显示Cy7特征峰,荧光量子产率略低于游离Cy7而稳定性优于直接酚-染料偶联。建议标记度控制在1:1(EGCG:Cy7),以兼顾光谱纯度与结构均一性。主要表征手段包括^1H/^13C NMR、HR-ESI-MS或MALDI-TOF、RP-HPLC纯度与保留时间、UV-Vis/PL光谱、动态光散射(如需)。

制备方法(两步法,先引入胺手柄再与Cy7-NHS偶联):

步骤1(EGCG-PEG-NH2制备):在避光、干燥条件下,将EGCG溶于无水DMF(或DMSO),加入丁二酸酸酐(1.2–1.5 eq)与催化量DMAP/TEA,于室温搅拌2–4 h,选择性形成EGCG-半琥珀酸酯(在酚羟基上引入–COOH)。反应液经减压除溶剂后以水/乙酸乙酯萃取或直接RP-HPLC半制备纯化,得EGCG-SA。随后用EDC·HCl/NHS(各1.1–1.3 eq)在pH 5.5–6.0的MES缓冲或DMF中活化–COOH 20–40 min,加入H2N-PEG_n-NH2(n=3–6,1.0–1.2 eq),调pH至7.5–8.0,室温避光反应2–6 h,得到以单端胺暴露的EGCG-PEG-NH2。用脱盐柱或RP-HPLC纯化,冻干备用。

步骤2(Cy7标记):取Cy7-NHS酯(1.1 eq)溶于少量无水DMF,滴加到含EGCG-PEG-NH2的0.1 M碳酸氢盐缓冲/DMF混合体系(v/v≈3/1,pH 8.3–8.6),总有机相不超过30%。在氮气与避光条件下搅拌1–2 h(薄层或分析HPLC监测NHS峰消失与产物峰生成)。反应完成后加入少量甘氨酸淬灭残余NHS酯,稀释以水相为主的流动相,采用C18 RP-HPLC(梯度:水/0.1%TFA-乙腈/0.1%TFA)分离,收集主峰并冻干,得CY7-EGCG(预期得率30–60%,纯度>95%)。

表征与储存:

确认分子量(HR-MS),记录λ_max与荧光发射峰,计算标记度(A_750与A_280校正)。样品分装于棕色瓶,4 °C避光保存,短期配制成pH 7.4缓冲液使用;长期可-20 °C冻干保存并避免反复冻融。

产品名称:CY7-EGCG,CY7标记儿茶素

纯度:95%+

性状:固体或液体

储藏条件:-20°C干燥避光保存

包装规格:50mg  100mg  250mg  500mg(按需提供)

厂家:齐岳生物

CY7-EGCG

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务,如活性酯(NHS酯)、马来酰亚胺(MAL)、叠氮(N₃)、炔基(alkyne)等,便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合,实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外,齐岳生物还提供定制染料标记服务,包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物,满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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