CY7-Protamine,CY7标记精蛋白的合成步骤概述
CY7-Protamine是将近红外荧光染料Cyanine7与精蛋白(Protamine, PRT)分子共价偶联形成的标记蛋白。精蛋白是一类低分子量、高赖氨酸含量的碱性蛋白,用于核酸复合物形成、细胞转染和药物递送研究。CY7标记赋予其荧光可视化功能,有助于研究精蛋白的分布、递送效率和与核酸或细胞膜的相互作用。
合成步骤概述:
蛋白溶解与缓冲体系选择
将精蛋白溶解于中性至微碱性缓冲液(如PBS pH 7.4),保持蛋白溶解状态,防止聚集。低盐浓度可减少静电屏蔽,提高标记效率,同时保护蛋白构象。
CY7试剂选择与预处理
选择CY7-NHS酯或CY7-马来酰亚胺酯作为标记试剂。NHS酯用于与蛋白赖氨酸残基偶联,马来酰亚胺酯用于与半胱氨酸残基形成硫醚键。染料可先溶解于少量DMSO或DMF中,以提高反应效率。
偶联反应
缓慢将CY7试剂加入蛋白溶液,控制染料与精蛋白摩尔比(一般为3–5:1),在室温避光条件下搅拌2–6小时。
pH维持在7–8区间,既保证染料活性,又避免蛋白构象改变。
反应终止
反应完成后可加入甘氨酸或羟胺封闭残余活性基团,防止后续副反应。
纯化
通过透析、凝胶过滤或离心柱去除未结合的染料及副产物,得到纯化的CY7-Protamine。透析常用分子量截留约3–5 kDa的膜,保证标记物去除自由染料而不损失蛋白。
表征与质量控制
UV-Vis和荧光光谱:确认标记效率和荧光性能。
SDS-PAGE:分析蛋白大小和纯度。
质谱:验证偶联分子量变化。
储存与使用
纯化后的CY7-Protamine低温避光储存,避免反复冻融。可用于核酸复合物构建、细胞摄取研究和药物递送体系的可视化分析。
通过上述步骤,CY7-Protamine兼具精蛋白的功能与CY7近红外荧光特性,可在细胞成像、核酸载体研究及药物递送实验中发挥重要作用。
产品名称:CY7-Protamine,CY7标记精蛋白
纯度:95%+
性状:固体或液体
储藏条件:-20°C干燥避光保存
包装规格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
厂家:齐岳生物
关于我们
齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务,如活性酯(NHS酯)、马来酰亚胺(MAL)、叠氮(N₃)、炔基(alkyne)等,便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合,实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外,齐岳生物还提供定制染料标记服务,包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物,满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。
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