DMPE-CY5.5，CY5.5标记二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱的表征方法

DMPE–Cy5.5 为将近红外染料 Cy5.5 共价接入磷脂 PE 头基形成的脂类荧光探针。分子由两条 C14 疏水链（肉豆蔻酰）和带游离胺的乙醇胺头基构成，Cy5.5 提供 ~675–710 nm 区域的激发/发射特征，使产物既能牢固嵌入脂质双层，又能用于深红/近红外成像、FRET 配对与脂质体示踪。共价连接（酰胺键）较非共价嵌入更稳定，便于定量示踪与长期成像。

合成机理上常采用 Cy5.5–NHS 酯与 PE 游离一°胺的亲核取代反应：胺对 NHS 酯碳酰碳发生亲核攻击，形成四面体中间体，离去 NHS 生成稳定的酰胺键。该反应易受水解竞争（NHS 水解）、溶剂性与胺质子化程度影响，因而需要无水、弱碱条件以提升产率。

工艺要点与条件优化：优先选用无水溶剂（无水 DMF 或少量 DMSO 与氯仿共溶）以兼顾脂类与染料溶解性；将 DMPE 预干燥为薄膜并在惰性气氛下溶解，Cy5.5–NHS 用少量无水 DMF 配制新鲜储备液。摩尔比常取 DMPE：Cy5.5 = 1：1.1–1.5（轻微过量 NHS 酯推动反应）；加入 DIPEA 或 TEA（约 2–5 当量）中和并去质子化胺。温和条件（室温至 25°C，4–16 h）常能兼顾反应速率与染料稳定性；低温可减缓副反应但需延长时间。

常见难点与控制策略：① NHS 酯水解 —— 严格无水操作并在短时间内使用染料溶液；② 染料/脂类聚集导致低有效浓度 —— 使用稀溶液并在反应后稀释以降低聚集；③ 氧化与光降解 —— 全程避光并添加微量剂（如 BHT）在必要时；④ 反应监测困难 —— 推荐使用 analytical RP-HPLC（检测 680–710 nm）或 TLC（硅胶/反相，配合染料可视化）跟踪。

纯化与分离：反相 preparative HPLC 是首选，乙腈/水 梯度（可含 0.1% 甲酸或三氟乙酸）可有效分离未反应染料、未反应 DMPE 与目标产物。硅胶柱在某些体系亦可用于预纯化（以 CHCl₃/MeOH 梯度洗脱），但对亲脂染料峰展宽与回收率较差。回收馏分需迅速去溶剂并用氮气或低温冻干保存。

表征方法：UV-Vis/荧光（确认 Cy5.5 吸收与发射峰位及摩尔吸光系数）、ESI-MS 或 MALDI-TOF（分子量确认）、¹H NMR/³¹P NMR（头基与磷酸完整性，注意长链信号展宽）、反相 HPLC（纯度 >95% 为佳）。功能验证可将产物置于脂质体或模型膜中测试嵌入效率、荧光淬灭/增强与光稳定性。

放大与工艺转化：放大合成时应控制溶解度与混合均匀性，避免高浓度下的聚集与不可逆吸附；纯化采用分批式 preparative HPLC 或流动相萃取相结合以提高产率与通量。为获得可控的生物相容性与膜外可及性，常在 PE 与染料之间引入 PEG 链作为 spacer（如 DSPE–PEGn–NH₂ 先与 Cy5.5 偶联），改善水相分散性并降低螯合或非特异结合。

若目标为 PC（无游离胺）的 Cy5.5 标记，可先制备含胺或叠氮/炔基修饰的 PC 骨架，或采用点击化学（Cy5.5–azide 与 alkyne-modified lipid）完成共价连接。总体而言，成功制备高纯度 DMPE–Cy5.5 依赖于严格的无水避光条件、适当的溶剂体系、反相 HPLC 纯化及多技术表征，以确保产物在膜成像与生物材料应用中的可靠性与可重复性。

产品名称：DMPE-CY5.5，CY5.5标记二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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