FITC-HSA，荧光素标记人血清白蛋白的反应步骤

FITC-HSA（荧光素标记人血清白蛋白）是一种通过将异硫氰酸荧光素（FITC, Fluorescein isothiocyanate）与人血清白蛋白（Human Serum Albumin, HSA）共价偶联形成的荧光衍生物。HSA是一种分子量约66.5 kDa的单体蛋白，具有丰富的赖氨酸和半胱氨酸残基，提供了多个可用于化学修饰的氨基位点。FITC标记赋予HSA荧光特性，使其在生物化学研究、药物递送和细胞示踪中具有重要应用价值。

FITC-HSA的反应步骤主要包括溶液制备、偶联反应、纯化及表征四个环节。首先，将HSA溶解于碳酸氢钠缓冲液（pH 8.0–9.0）中，保证蛋白质处于稳定构象，同时使赖氨酸氨基处于非质子化状态，提高亲核活性。FITC通常溶解于少量DMSO中，以确保荧光团充分溶解，并避免直接加入水溶液造成团聚或沉淀。

偶联反应步骤中，将FITC溶液缓慢加入HSA缓冲液中，在弱碱性条件下进行反应。反应过程中，FITC的异硫氰酸基团（–N=C=S）作为亲电中心，与HSA赖氨酸残基上的自由伯氨基发生亲核加成反应，生成稳定的硫脲键（–NH–C(=S)–NH–）。该反应通常在4–25℃条件下反应数小时，避免高温造成蛋白质变性或FITC降解。反应时间和FITC与HSA的摩尔比需根据实验设计优化，以控制标记密度，避免过度修饰导致蛋白质功能丧失或荧光猝灭。

偶联完成后，需要对反应混合物进行纯化，以去除未反应的FITC和低分子杂质。常用方法包括透析、凝胶过滤（Sephadex G-25）或超滤技术，通过分子量差异将FITC-HSA与游离FITC分离。纯化后的FITC-HSA通常呈淡绿色或黄绿色溶液，透明均匀，无沉淀或浑浊现象。

表征步骤主要通过紫外-可见光谱和荧光光谱进行。FITC-HSA在紫外区吸收峰约495 nm，对应FITC的芳香结构吸收；荧光发射峰约520 nm，呈绿色荧光，可用于荧光显微镜、流式细胞仪及荧光分光光度计检测。此外，通过SDS-PAGE或凝胶染色可确认HSA蛋白完整性及偶联效率；高效液相色谱（HPLC）也可用于评估纯度及标记均一性。

在反应设计中，还需注意保护HSA构象和生物活性。弱碱性条件和低温反应可保持蛋白质二级和三级结构稳定，同时避免FITC高浓度或过长反应时间造成蛋白质聚集或功能丧失。偶联后，FITC-HSA仍保留HSA与小分子药物、脂质及受体结合的能力，可用于药物递送研究和体内分布示踪。

综上所述，FITC-HSA的反应步骤主要包括：

溶液准备：HSA溶于pH 8.0–9.0缓冲液，FITC溶于DMSO。

偶联反应：在弱碱性条件下，FITC异硫氰酸基与HSA氨基形成硫脲键，反应温度4–25℃，控制时间和摩尔比以优化标记密度。

纯化：通过透析、凝胶过滤或超滤去除游离FITC和低分子杂质，获得均一、稳定的FITC-HSA。

表征：通过紫外-可见光谱、荧光光谱、SDS-PAGE及HPLC确认偶联效率、荧光特性及蛋白完整性。

通过上述步骤，FITC-HSA能够在保持HSA生物功能的同时，实现荧光示踪，为药物递送、受体结合分析及细胞内分布研究提供可靠工具。

产品名称：FITC-HSA，荧光素标记人血清白蛋白

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

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齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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