RB-ConA，罗丹明标记刀豆球蛋白A的反应机制

RB-ConA（Rhodamine B-Concanavalin A）是一种将植物来源的糖结合蛋白刀豆球蛋白 A（Concanavalin A, ConA）与罗丹明 B（Rhodamine B, RB）荧光染料通过共价偶联形成的功能性生物分子。ConA 是一种从刀豆（Canavalia ensiformis）中分离得到的植物凝集素，属于四聚体蛋白，能够特异性识别 α-D-甘露糖和 α-D-葡萄糖残基，用于糖蛋白研究、细胞膜糖基化分析和靶向递送研究。通过 RB 标记 ConA，不仅赋予蛋白可视化荧光信号，还可在生物体系中追踪蛋白的结合、分布及作用过程。

从化学结构角度看，RB-ConA 由三部分组成：① ConA 蛋白主体，具有丰富的赖氨酸氨基和天冬氨酸、谷氨酸羧基，提供偶联反应的活性位点；② 罗丹明 B 荧光团，含共轭芳香环体系及活性官能团（如羧基、NHS 酯），可发射橙红色荧光（激发波长约 540–555 nm，发射波长约 565–580 nm）；③ 偶联链，通过酰胺键或酯键将 RB 与蛋白质赖氨酸残基偶联，保持荧光团空间独立，以避免干扰蛋白构象或功能。

RB-ConA 的反应机制主要基于亲核取代反应原理：

活性位点选择：ConA 中赖氨酸 ε-氨基是常用的偶联位点，亲核性强，可在中性或弱碱性缓冲条件下与 RB-NHS 酯或 RB-异氰酸酯发生共价结合。反应过程中，蛋白质羧基通常不会参与偶联，从而保持蛋白整体构象稳定。

酰胺键形成：在 pH 7–8 的缓冲溶液中，RB 的 NHS 酯基与赖氨酸氨基发生亲核取代，释放 N-羟基琥珀酰亚胺，形成稳定的酰胺键连接 RB 与 ConA。该反应温和，通常在室温或略低温下进行，以避免蛋白质变性或荧光团降解。

偶联度调控：通过调节 RB 与 ConA 的摩尔比、反应时间和温度，可控制偶联度。偶联度适中时，可保证蛋白的糖结合活性不受影响，同时提供足够荧光信号。偶联过多可能造成空间位阻或构象改变，影响 ConA 的生物功能。

反应条件优化：偶联过程中通常使用弱碱性缓冲液（如 PBS pH 7.4–8.0），避免高浓度盐或强酸强碱，以维持蛋白稳定性。反应后，通过透析、凝胶过滤或超滤等方法去除未反应的自由 RB，获得高纯度、功能完整的 RB-ConA。

空间分离与功能保留：偶联链设计保证荧光团与蛋白活性位点之间有足够的空间隔离，减少荧光团对 ConA 四聚体构象的干扰，使蛋白仍能识别 α-D-甘露糖和 α-D-葡萄糖残基。RB 的荧光信号允许对 ConA 在细胞膜、糖基化分子或纳米载体上的定位和分布进行实时可视化。

多功能应用：RB-ConA 可用于细胞膜糖基分析、糖蛋白追踪、膜受体标记以及药物递送系统的靶向研究。荧光特性使其能够与共聚焦显微镜、流式细胞术及荧光光谱分析结合，实现蛋白结合动力学和分布行为的高精度研究。

综上所述，RB-ConA 是通过 ConA 蛋白赖氨酸氨基与罗丹明 B 活性酯偶联形成的荧光功能化蛋白。其反应机制以亲核取代酰胺化为核心，偶联温和且可控，保证蛋白构象与糖结合活性，同时赋予明亮、稳定的荧光信号。该分子应用于糖蛋白研究、细胞膜糖基化分析以及药物递送体系，可实现蛋白功能与荧光可视化的兼顾，为生物化学研究提供强有力工具。

产品名称：RB-ConA，罗丹明标记刀豆球蛋白A

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

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齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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