RB-Cytochromec，罗丹明标记细胞色素C的反应原理（Rhodamine B-Cytochrome c）

RB-Cytochrome c（Rhodamine B-Cytochrome c）是一种通过将细胞色素 c（Cytochrome c, Cyt c）与罗丹明 B（Rhodamine B, RB）荧光染料共价偶联形成的功能化蛋白分子。细胞色素 c 是一种线粒体膜上的小型血红蛋白蛋白，参与电子传递链和细胞凋亡调控，具有丰富的赖氨酸氨基、半胱氨酸巯基及羧基官能团，可作为偶联反应的活性位点。将 RB 荧光团引入 Cyt c 不仅赋予蛋白可视化的荧光特性，还可以用于研究线粒体膜动力学、蛋白质相互作用及药物递送体系。

从化学结构来看，RB-Cytochrome c 主要由三部分组成：① Cyt c 蛋白骨架，含丰富的氨基、羧基和巯基，提供偶联反应位点；② 罗丹明 B 荧光团，具有共轭芳香环体系和活性官能团（如 NHS 酯、异氰酸酯或活性胺），发射橙红色荧光（激发波长约 540–555 nm，发射波长约 565–580 nm）；③ 偶联链，通过酰胺键或巯基偶联将 RB 连接到蛋白质上，保持荧光团与蛋白活性位点空间独立，避免影响蛋白功能。

RB-Cytochrome c 的反应原理主要包括以下几个方面：

活性位点选择：Cyt c 中赖氨酸 ε-氨基是常用的偶联位点，亲核性强；半胱氨酸巯基也可参与特异性偶联。选择适当的反应位点可以在保证蛋白质构象和功能不受损的前提下，实现荧光标记。

NHS 酯偶联机制：若采用 RB-NHS 作为荧光团衍生物，反应基于亲核取代原理。蛋白赖氨酸 ε-氨基攻击 RB-NHS 的羧酸活性酯碳原子，释放 N-羟基琥珀酰亚胺，形成稳定的酰胺键连接 RB 与 Cyt c。该过程温和、特异性高，通常在 pH 7.4–8.5 的缓冲液中进行。

巯基偶联机制：如果选择半胱氨酸巯基进行偶联，可采用含活性硫基的 RB 衍生物（如 RB-Maleimide）。巯基对马来酰亚胺或其他硫亲核活性团发生加成反应，形成稳定的硫醚键，将荧光团连接到蛋白上，同时对蛋白构象干扰小。

偶联度与空间隔离：偶联反应通常控制摩尔比与反应时间，调控 RB 的偶联度。偶联度适中可保证荧光强度足够，同时保持 Cyt c 的电子转移活性和线粒体结合功能。通过引入短链或柔性偶联链，荧光团与蛋白质活性位点空间分离，减少淬灭和构象干扰。

反应条件优化：偶联反应通常在室温或低温下进行，以维持蛋白质的三维结构和功能活性。反应缓冲液选择中性或弱碱性，避免强酸强碱及高盐条件，以防止蛋白质变性或荧光团降解。

纯化与验证：反应完成后，通过透析、凝胶过滤或离心超滤去除未反应的自由 RB 分子。产物可通过紫外-可见光谱、荧光光谱及 SDS-PAGE 等方法验证。荧光信号的存在和稳定性表明 RB-Cyt c 已成功形成，蛋白质功能可通过生物化学或细胞实验进一步确认。

应用潜力：RB-Cyt c 可用于线粒体膜研究、电子传递链动态分析、凋亡机制探索及药物递送体系研究。荧光信号允许在体外或细胞内追踪 Cyt c 的定位与分布，同时偶联设计保证蛋白生物功能保留，为研究蛋白质行为提供可靠的实验工具。

综上所述，RB-Cytochrome c 是通过 Cyt c 赖氨酸或半胱氨酸活性位点与罗丹明 B 偶联形成的荧光功能化蛋白。其反应原理基于酰胺键或硫醚键形成的亲核取代反应，偶联温和且可控，既保留蛋白结构与功能，又赋予明亮稳定的荧光信号，为蛋白质研究、线粒体动力学及药物递送体系提供强有力的实验工具。

产品名称：RB-Cytochromec，罗丹明标记细胞色素C

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

推荐产品：

CY5.5标记精氨酸

CY5.5-Arginine

CY5.5标记菊粉

CY5.5-inulin

CY5.5标记聚酰胺-胺树状大分子G6

CY5.5-PAMAMG6

CY5.5标记聚氧乙烯

CY5.5-Polyoxyl

CY5.5标记聚蔗糖

CY5.5-Ficoll

CY5.5标记卡泊三醇

CY5.5-Calcipotriol

仅供科研，不能用于人体实验AXC.2025.09