CY3-TAT，花菁染料CY3标记穿膜肽的偶联反应条件研究

CY3-TAT 是花菁染料 CY3 与穿膜肽 TAT（HIV-1 转录激活因子衍生的短肽，常用序列为 YGRKKRRQRRR）偶联而成的荧光探针。TAT 肽因其高度富含精氨酸和赖氨酸，带有正电荷，能够与细胞膜相互作用并实现跨膜转运。因此，CY3-TAT 不仅是一种细胞穿透性荧光探针，也是研究肽类药物递送机制的重要工具。

合成过程研究主要包括以下几个环节：

多肽合成

TAT 肽通常通过 固相合成（SPPS） 制备。采用 Fmoc 法在树脂上逐步延伸氨基酸序列，过程中每步通过去保护和缩合反应实现。由于 TAT 肽富含碱性残基，合成时需严格控制偶联效率，避免链延伸不完全。合成完成后，经三氟乙酸（TFA）裂解得到游离肽。

染料选择与偶联位点

CY3 常以 CY3-NHS ester 或 CY3-maleimide 形式引入。

若采用 CY3-NHS ester，则与 TAT 肽 N 端的氨基或赖氨酸残基上的 ε-氨基反应，形成酰胺键；

若采用 CY3-maleimide，则需在 TAT 序列中引入一个半胱氨酸残基，与巯基发生 Michael 加成。

选择偶联位点时需避免关键的精氨酸或赖氨酸残基被修饰，以免削弱 TAT 的穿膜活性，因此常将 CY3 修饰在 N 端或通过 linker（如 PEG）与肽链连接。

偶联反应条件研究

溶剂：常用 PBS（pH 7.4–8.0）或碳酸氢钠缓冲液；CY3-NHS ester 需先溶于少量无水 DMF/DMSO。

反应时间：通常 2–4 小时，避光搅拌；

摩尔比：一般 CY3:TAT = 2:1，可确保单一修饰为主。

反应完成后，用反相 HPLC 分离目标产物，收集荧光峰对应组分。

纯化与表征

纯化采用 RP-HPLC，产物常因带正电荷在 C18 色谱柱上保留时间较短，而 CY3 的引入会增加疏水性，使其峰型与未修饰肽明显区分。表征方面：

质谱（MALDI-TOF 或 ESI-MS） 确认分子量与修饰数；

UV-Vis 光谱 同时检测到 550 nm（CY3 吸收峰）与 280 nm（肽链吸收峰）；

荧光光谱 显示 570 nm 发射峰；

电泳实验 可验证产物带电性质变化。

合成过程关键点

研究表明，CY3 的修饰位置直接影响 TAT 的跨膜效率。N 端修饰通常保留了肽链的穿膜功能，而赖氨酸侧链修饰则可能降低其与细胞膜的结合能力。因此在合成过程中，研究者常设计带 linker 的 CY3-TAT，既保证荧光信号强度，又限度维持 TAT 的生物活性。

综上，CY3-TAT 的合成过程研究揭示了 肽链化学合成、染料选择、偶联位点控制与产物表征 的系统方法。它不仅是细胞穿透机制研究的重要模型，也是构建新型递送系统和荧光探针的核心模块。

产品名称：CY3-TAT，花菁染料CY3标记穿膜肽

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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仅供科研，不能用于人体实验AXC.2025.09