CY3-Collagen-v，花菁染料CY3标记胶原蛋白V型的注意事项

Cy3-Collagen-V是一种将花菁染料Cy3与胶原蛋白V型（Collagen type V, Collagen-V）通过共价偶联形成的荧光标记分子，用于细胞成像、组织工程及细胞-外基质相互作用研究。胶原蛋白V型属于纤维型胶原家族，是细胞外基质的重要组分之一，常与胶原I型共组装，参与纤维形成和组织结构调控，其分子由α1(V)和α2(V)链组成，形成三股螺旋结构。Cy3是一种红橙色荧光染料，结构为两个芳香环通过多亚甲基链共轭连接形成平面共轭体系，具有强吸光性（λmax约550 nm）、高量子产率及优异光稳定性，能够在荧光显微镜下提供清晰可见的信号。Cy3-Collagen-V通过化学偶联在保持胶原V型三螺旋结构和生物学功能的同时，实现分子级荧光示踪。

制备方法

材料准备

制备Cy3-Collagen-V所需的原料包括高纯度胶原V型（通常来源于人或动物组织重组蛋白）、Cy3活性衍生物（如Cy3-NHS酯）、碳酸氢盐缓冲液或PBS缓冲液（pH 7.4–8.0）、无水有机溶剂（如DMSO，用于溶解Cy3-NHS）及适量去离子水。反应过程中需保持低温（0–4℃）以保持胶原蛋白的三级结构稳定。

胶原V型预处理

将胶原V型溶解于低浓度的缓冲液中（如0.1 M NaHCO₃，pH 7.8），使蛋白质充分溶解并保持三螺旋构型。缓冲液条件需避免高盐、高温或端pH，以防止蛋白质变性或纤维聚集。溶液浓度通常控制在1–2 mg/mL以保证反应均匀进行。

Cy3溶解与添加

Cy3-NHS酯或Cy3-ITC溶解于少量DMSO中形成高浓度染料储备液。随后将染料缓慢加入胶原V型溶液中，确保体积比不超过总反应体系的10%，避免有机溶剂对蛋白质结构造成干扰。反应摩尔比一般控制在1:10至1:20（Cy3:胶原V型赖氨酸残基），以实现适度标记并保留蛋白功能。

偶联反应

混合溶液在0–4℃下缓慢搅拌反应2–12小时，保持缓冲液pH在7.4–8.0之间，使Cy3-NHS酯与胶原V型赖氨酸氨基形成稳定的酰胺键。反应时间和温度的控制可避免胶原蛋白三螺旋结构的破坏，同时确保充分偶联。

纯化与去除游离染料

反应结束后，使用透析（分子量截断约10–12 kDa）、凝胶过滤或超滤柱去除未结合的Cy3染料及小分子副产物。透析缓冲液通常为PBS或低盐缓冲液，温度保持在4℃，持续数小时至过夜，直至外部溶液无明显颜色。

质量检测与储存

纯化后的Cy3-Collagen-V可通过UV-Vis吸收光谱和荧光光谱测定标记效率和荧光特性。SDS-PAGE或凝胶染色可评估蛋白完整性及偶联均一性。标记后的产物可在缓冲液中加入少量甘油或剂（如DTT少量）稳定保存于-20℃或-80℃。

注意事项

控制Cy3与胶原V型摩尔比，避免过度标记导致荧光淬灭或蛋白失活。

保持低温和适宜pH，以保护胶原三螺旋结构和自组装能力。

纯化步骤需彻底去除游离染料，以减少背景荧光干扰。

总结

Cy3-Collagen-V通过Cy3-NHS酯与胶原蛋白V型的赖氨酸残基偶联形成稳定酰胺键，制备过程中兼顾荧光标记和蛋白质结构保持。该制备方法包括蛋白预处理、荧光染料溶解与添加、缓冲条件下偶联反应、纯化去除游离染料及质量检测。制得的Cy3-Collagen-V具有荧光示踪功能，可用于细胞成像、组织工程及微环境研究，为胶原相关生物学研究提供高灵敏、可视化的实验工具。

产品名称：CY3-Collagen-v

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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仅供科研，不能用于人体实验AXC.2025.09