CY3-Streptavidin，花菁染料CY3标记链霉亲和素的反应条件

Cy3-Streptavidin是将花菁染料Cy3共价偶联至链霉亲和素（Streptavidin, SA）形成的荧光标记蛋白，用于生物检测、分子示踪和免疫分析。链霉亲和素是一种由四聚体蛋白组成的细菌来源蛋白，具有高亲和力和特异性结合生物素（Biotin）的能力（结合常数Ka≈10¹³–10¹⁵ M⁻¹），应用于生物标记、免疫检测、蛋白固定化及纳米技术研究。Cy3是一种红橙色荧光染料，吸光约550 nm，发射波长约570 nm，具有高量子产率和良好光稳定性。通过Cy3标记，链霉亲和素在保持生物素结合活性的同时，可实现荧光示踪，用于多种生物实验和分子成像研究。

反应条件

反应原理

Cy3染料通常以活性酯形式（如NHS酯）提供，与链霉亲和素蛋白的赖氨酸侧链氨基发生亲核取代反应，形成稳定的酰胺键。该共价偶联过程属于温和的蛋白质化学修饰反应，通常不会破坏蛋白的三级结构或生物素结合活性。

缓冲体系选择

反应需在适宜pH的缓冲液中进行，以保证蛋白结构稳定和氨基反应活性。常用缓冲体系为pH 7.4–8.5的磷酸盐缓冲液（PBS）或碳酸盐缓冲液（0.1 M NaHCO₃），pH过低会降低氨基的亲核性，而pH过高可能导致蛋白构象不稳定或自聚集。缓冲液中避免使用含胺类或硫醇类试剂（如Tris、DTT、β-巯基乙醇），以防与NHS酯竞争反应。

Cy3与链霉亲和素摩尔比

偶联反应通常采用Cy3与SA蛋白的摩尔比为3:1至10:1，可根据所需标记密度调节。低摩尔比可保证蛋白生物活性化，高摩尔比可提高荧光强度，但可能影响蛋白折叠或生物素结合能力。标记密度通常通过紫外-可见光谱测定Cy3吸光度与蛋白浓度比值进行评估。

温度与时间控制

反应在低温（0–4℃）或室温条件下进行，通常持续1–4小时。低温有助于保持蛋白稳定性，减少聚集或降解。过长的反应时间可能导致非特异性偶联或蛋白部分变性。轻柔搅拌可保证反应均匀，避免局部浓度过高造成蛋白聚集。

溶剂与染料溶解

Cy3-NHS酯需溶解于少量有机溶剂（如DMSO或DMF）形成高浓度储备液，然后缓慢加入水性蛋白溶液中，避免有机溶剂比例过高（通常不超过5%），以防蛋白变性。

反应终止与纯化

反应完成后，可通过加入甘氨酸或Tris缓冲液终止未反应的活性酯。随后需去除游离Cy3染料以获得纯净的Cy3-Streptavidin，常用方法包括透析、凝胶过滤色谱（如Sephadex G-25）或超滤。纯化过程中需保持低温和缓冲液稳定性，避免蛋白失活。

产物稳定性与储存

纯化后的Cy3-Streptavidin可在PBS缓冲液中稳定储存，并加入低浓度防腐剂（如0.02% NaN₃）防止微生物污染。避光保存于4℃短期使用，-20℃可用于长期储存。荧光性能和生物素结合活性在适当条件下可保持数月至一年。

总结

Cy3-Streptavidin通过NHS酯形式的Cy3与链霉亲和素赖氨酸氨基共价偶联形成，反应需在pH 7.4–8.5缓冲液中低温轻搅拌进行，摩尔比及反应时间需优化以保证荧光强度和蛋白生物活性。反应完成后通过透析或凝胶过滤去除游离染料，获得高纯度Cy3-Streptavidin。该荧光标记蛋白结合了Cy3可视化功能与SA高亲和力生物素结合特性，应用于免疫检测、分子示踪、荧光成像和生物材料标记等实验体系。

产品名称：CY3-Streptavidin，花菁染料CY3标记链霉亲和素

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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