CY5.5-Andrographolide，花菁染料CY5.5标记穿心莲内酯的表征方法

CY5.5-Andrographolide 是一种由产物穿心莲内酯（Andrographolide）与近红外花菁染料CY5.5偶联而成的荧光探针分子，兼具小分子骨架的生物活性与荧光团的光学特性。穿心莲内酯是一种来源于穿心莲属植物的二萜内酯，分子中含有多个羟基（主要位于C-3、C-19和C-14位置）和内酯环结构，为化学修饰提供了可利用的官能团。CY5.5则属于对称性较高的花菁染料，发射波长约690–710 nm，激发在675 nm 左右，处于近红外区，具有高量子产率、良好的水溶性和低背景干扰。将两者结合得到的CY5.5-Andrographolide在结构上表现为：穿心莲内酯通过活性羟基与CY5.5上的NHS酯或类似活泼酯键合，形成稳定的酯键或碳酸酯键，从而在保持小分子骨架基本完整性的同时赋予其荧光可追踪特性。

纯化过程

CY5.5-Andrographolide的合成反应通常在无水条件下进行，常用DMF或DMSO作为溶剂，在碱性缓冲液（如三乙胺或DIPEA）存在下将CY5.5-NHS ester与穿心莲内酯中活泼羟基偶联。反应结束后需要去除未反应的染料和小分子副产物。纯化常采用以下步骤：

粗纯化：将反应液通过旋蒸除去有机溶剂，残留物用去离子水与乙腈混合溶解，并进行液液萃取以去除不溶性杂质。

柱层析分离：可选用反相C18硅胶柱，以水/乙腈（含0.1%三氟乙酸或甲酸）为洗脱体系进行梯度洗脱。由于CY5.5染料具有强烈的紫外-可见吸收信号，目标产物在254 nm或680 nm处具有峰值，因此便于收集。

制备型HPLC：为了获得高纯度产物，通常采用制备型高效液相色谱进行终纯化。C18柱条件下，以水（含0.1%TFA）与乙腈梯度洗脱，收集对应保留时间的单峰组分。纯化后产物冻干保存，得到红紫色固体粉末。

表征方法

对CY5.5-Andrographolide的表征通常结合光谱学、质谱及核磁共振等多种：

紫外-可见光谱（UV-Vis）：产物在675 nm左右出现强吸收峰，典型的CY5.5特征吸收峰，另在320 nm处可观察到穿心莲内酯部分的吸收。偶联成功后，染料吸收峰位置基本不变，但摩尔吸光系数降低，表明染料分子环境发生改变。

荧光光谱：激发波长约675 nm，发射峰在690–710 nm之间，荧光光谱形态与游离CY5.5相似，说明染料在偶联后仍保持发光特性。

质谱（ESI-MS 或 MALDI-TOF）：分子离子峰出现在理论分子量对应的m/z值处，可确认目标化合物的分子质量，偶联产物较游离穿心莲内酯和CY5.5均发生质量偏移，符合预期。

核磁共振（¹H NMR, ¹³C NMR）：可见到穿心莲内酯特征信号（如内酯环质子δ 6.5–7.0区域）以及染料芳环信号，连接位点羟基质子信号消失，取而代之出现酯键相关信号，进一步验证偶联成功。

HPLC纯度分析：采用分析型C18柱检测，CY5.5-Andrographolide通常显示为单一峰，纯度可达95%以上。

稳定性测试：在PBS缓冲液中（pH 7.4，37 ℃）进行稳定性检测，染料与穿心莲内酯之间的酯键在一定时间内保持稳定，不易发生解离，保证探针在常规实验条件下的可靠性。

综上，CY5.5-Andrographolide是一种兼具产物结构特征与近红外光学性能的标记分子，其合成途径清晰，纯化依赖制备型HPLC，表征则通过UV-Vis、荧光光谱、质谱和NMR等多确认结构与纯度。这类产物为研究小分子产物在复杂生物体系中的分布、定位和相互作用提供了直观的荧光可视化工具。

产品名称：CY5.5-Andrographolide，花菁染料CY5.5标记穿心莲内酯

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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