CY5.5-E2，花菁染料CY5.5标记雌二醇的合成思路

CY5.5-E2 是一种将甾体激素雌二醇（E2, 17β-estradiol）与花菁染料CY5.5偶联得到的近红外荧光探针。雌二醇分子为甾体骨架，分子式C18H24O2，具有典型的甾体四环结构，并含有C3和C17位置的两个羟基官能团，具有较强的亲核性和化学修饰潜力。CY5.5则是具有强烈近红外荧光发射的花菁染料，激发波长在675 nm左右，发射波长约695–710 nm，具有较低自发荧光干扰和较高组织穿透能力。通过将雌二醇与CY5.5偶联，得到的CY5.5-E2兼具甾体分子的结合特性与光学可视化能力，可作为雌激素相关研究中的光学示踪探针。

合成思路

由于雌二醇含有两个羟基，其中C3位苯环上的酚羟基活性更高，常作为偶联位点。CY5.5常以活泼酯（如CY5.5-NHS ester）或其他衍生化形式提供反应活性基团。合成思路主要有两条：

直接将雌二醇的羟基与CY5.5活泼酯反应，形成酯键或碳酸酯键；

通过引入中间接头（如琥珀酸酐、PEG linker）先对雌二醇羟基进行修饰，再与CY5.5-NHS偶联。第二种方式常用于提高水溶性与空间灵活性。

合成步骤概述

雌二醇活化修饰

称取适量雌二醇，溶于无水吡啶或DMF溶液中。

向反应液中滴加琥珀酸酐（Succinic anhydride）及催化剂（如DMAP），在室温或略升温（25–40 ℃）条件下反应数小时，使C3位羟基被修饰生成雌二醇-半琥珀酸酯（E2-succinate）。

粗产物经乙酸乙酯萃取后，用硅胶柱纯化得到带有羧基的E2衍生物。该步骤的关键是选择性地修饰C3羟基，而保留C17羟基的完整性。

雌二醇-活化酯制备

将E2-succinate溶于无水DMF中，加入EDC·HCl与NHS，反应数小时以将末端羧基转化为活泼酯（E2-succinate-NHS ester）。

该步骤生成的中间体具有较高的反应活性，需在无水、避光条件下短期使用，避免水解失活。

与CY5.5偶联

将CY5.5-amine 或 CY5.5带有伯胺基团的衍生物溶于DMF，缓慢加入E2-succinate-NHS ester溶液，在碱性缓冲（如DIPEA存在下）反应。

通过酰胺键连接实现雌二醇与CY5.5的共价偶联。此反应通常需搅拌12–24小时，保持避光条件以防止染料光漂白。

反应结束后，粗产物经旋蒸去除溶剂，再溶解于甲醇/水混合液，进行初步除盐处理。

纯化

将粗产物经反相C18柱层析或制备型HPLC纯化，使用水（含0.1%三氟乙酸）/乙腈梯度洗脱。

CY5.5强烈的近红外吸收特性可在675 nm检测产物峰。纯化后收集对应组分，冻干得到CY5.5-E2固体粉末，通常呈深红或紫红色。

表征

UV-Vis光谱：出现CY5.5特征吸收峰（~675 nm）与雌二醇紫外吸收峰（~280 nm），说明二者结合。

荧光光谱：激发波长675 nm，发射在695–710 nm之间，保持CY5.5特性。

质谱（MALDI-TOF或ESI-MS）：分子离子峰对应理论分子量，确认偶联成功。

NMR（¹H, ¹³C）：雌二醇骨架的甾体信号与染料芳香信号均可检测到，C3位羟基质子信号消失，说明偶联发生。

HPLC分析：单一峰证明纯度>95%，适合生物实验使用。

总结

CY5.5-E2的制备主要分为三个阶段：雌二醇羟基的琥珀酰化修饰、羧基的NHS活化以及与CY5.5的酰胺键偶联。该合成路线不仅保证了甾体骨架的完整性，还通过引入柔性连接臂提升了探针的稳定性和水溶性。纯化依赖于制备型HPLC，表征结合光谱学和质谱，终获得高纯度的CY5.5-E2，为研究雌激素结合过程与分布提供可视化工具。

产品名称：CY5.5-E2，花菁染料CY5.5标记雌二醇

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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