Cyanine5-Hemoglobin，，花菁染料CY5标记血红蛋白的标记反应

血红蛋白（Hemoglobin, Hb）是一种分子量约 64 kDa 的四聚体球状蛋白，由两条 α 链和两条 β 链组成，每条链含有血红素基团，具有多处赖氨酸残基可作为化学修饰位点。将花菁染料 Cy5 偶联至血红蛋白上，可以构建出既具备氧结合能力又具有荧光特性的探针分子。Cy5-Hb 的合成路线主要包括以下几个步骤：

蛋白预处理

选择高纯度的人或动物来源血红蛋白，溶于 pH 7.4 的 PBS 缓冲液中，浓度一般控制在 1–5 mg/mL。为减少背景干扰，通常需要透析去除杂质和低分子代谢物。

染料活化

采用 Cy5-NHS ester 作为标记前体。NHS 活性酯能够与蛋白中赖氨酸残基的 ε-氨基快速发生酰胺化反应，生成稳定的共价结合。Cy5-NHS ester 溶解于无水 DMSO 或 DMF 中，避免在水中提前水解失活。

标记反应

将 Cy5-NHS ester 溶液缓慢加入血红蛋白溶液中，通常以 Cy5 与 Hb 分子比为 5–10:1 作为投料比。反应在室温下进行，缓冲体系维持在 pH 8.0 左右，以保证赖氨基处于去质子化状态，利于与 NHS 酯反应。反应时间为 1–2 小时，需避光搅拌。

终止与纯化

反应完成后，加入 Tris 缓冲液或乙醇胺封闭残余的活性酯基团，避免进一步非特异性修饰。随后使用透析（10 kDa 膜）、凝胶过滤层析（Sephadex G-25）或离心超滤等方法去除游离 Cy5 染料。纯化后溶液呈现暗红色带荧光的特征。

产物表征

吸收光谱：在 540 nm 和 576 nm 处为血红蛋白的典型 Soret 带，同时在 640 nm 处出现 Cy5 特征吸收峰；

荧光光谱：激发波长 640 nm，发射峰位于 670 nm；

电泳分析：SDS-PAGE 显示血红蛋白条带位置正常，并可通过荧光扫描确认 Cy5 标记；

质谱或 MALDI：表明蛋白分子质量增加，说明有 Cy5 偶联。

标记度控制

通常在 2–4 个 Cy5 分子/每个 Hb 四聚体时，既可获得较强荧光信号，又不会影响血红蛋白的构象与功能。过度标记可能影响血红素结合位点，降低氧亲和力。

储存与应用

Cy5-Hb 溶液应在 4 ℃ 避光保存，加入 10% 甘油可增强稳定性。冻干后可长期保存于 −20 ℃。该标记物常用于血红蛋白在体内分布研究、血管成像、氧输运探针及与纳米载体复合物的构建研究。

综上，Cy5-Hemoglobin 的合成路线基于 Cy5-NHS ester 与蛋白赖氨基的酰胺化反应，具有高效、专一、条件温和的特点。该荧光血红蛋白不仅保留了氧结合能力，还具备荧光可视化功能，为血液动力学、蛋白运输及生物成像研究提供了理想工具。

产品名称：Cyanine5-Hemoglobin，，花菁染料CY5标记血红蛋白

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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