Cy5-phosphoramidite，花青素cy5荧光染料标记氰基-磷酸盐的反应步骤及机制

Cy5-phosphoramidite是一种将近红外荧光染料花菁素Cy5通过磷酰胺化学修饰转化为活性磷酸酰胺单元的功能性化合物。其核心结构由Cy5荧光团与磷酰胺基团（phosphoramidite）通过有机连接器连接而成。该结构不仅保留了Cy5的强荧光特性，同时提供了可用于核酸或寡核苷酸自动合成的活性磷酸酰胺位点，使其能够在DNA、RNA及类似寡聚物中实现共价偶联标记。Cy5-phosphoramidite应用于荧光探针合成、分子、核酸检测及活体成像研究。

反应步骤及机制

荧光团活化

首先将Cy5染料引入可反应的羟基或氨基端，通过有机合成方法引入连接器链（如短链醇、胺或PEG链），形成可与磷酸酰胺反应的中间体。这一步确保Cy5与磷酰胺基团之间有适当的空间，避免荧光淬灭，同时保证磷酸酰胺基团的反应活性。

磷酰胺化反应

将活化的Cy5中间体与氰基-磷酸二异丙基酯（cyano-phosphoramidite）在干燥有机溶剂（如二氯甲烷、乙腈）中进行偶联反应。此步骤为典型的磷酰胺化学反应：中间体的羟基或氨基对磷原子发起亲核进攻，取代溶剂中易离去基团，生成Cy5-phosphoramidite。反应通常在弱碱性或含有有机碱（如DIPEA, diisopropylethylamine）的条件下进行，以保证磷原子处于活化状态并提高偶联效率。

反应保护与条件控制

在整个偶联过程中，需严格排除水分，以防止磷酸酰胺被水水解。反应在惰性气体（如氮气或氩气）保护下进行，温度控制在0–25°C，既保证反应速度，又减少Cy5荧光团的光氧化或降解。

偶联产物的纯化

反应完成后，通常通过硅胶柱层析或高效液相色谱（HPLC）纯化得到Cy5-phosphoramidite产物，去除未反应的Cy5中间体和副产物。产物纯度高，可直接用于自动化寡核苷酸合成或其他生物标记实验。

寡核苷酸标记应用

Cy5-phosphoramidite在DNA或RNA合成过程中作为末端修饰单元或内部标记单元引入。其磷酸酰胺活性位点通过自动化合成仪器与寡核苷酸的3’-羟基发生化学反应，形成稳定的磷酸二酯键，保证荧光团牢固地整合到寡核苷酸骨架上。标记完成后，Cy5荧光团在650 nm激发、670 nm发射波段提供强烈信号，实现荧光检测、定量分析及活体成像。

特点与优势

高稳定性：形成的磷酸二酯键在生理环境下稳定，适合体内外实验。

荧光强度高：Cy5核心结构保证了近红外荧光信号，降低背景干扰。

产品名称：Cy5-phosphoramidite

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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